la cromatografia

Cromatografía
Índice de técnicas
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Definición:
La cromatografía es un método físico de separación en el que los componentes que se han de separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales está en reposo (fase estacionaria, F.E.) mientras que la otra (fase móvil, F.M.) se mueve en una dirección definida.
Otras definiciones (en la web): cromatograma,cromatografiar, cromatógrafo, fase ligada, fase inmovilizada, eluir, efluente, muestra, componentes de la muestra, soluto, disolvente, zona.
Otros términos: columna, lecho cromatográfico, empaquetamiento... (véase la sección de nomenclatura).
Hay 3 métodos principales de cromatografía: frontal, de desplazamiento y de elución. Sólo consideraremos este último, que es el más habitual, al menos enBioquímica y Biología Molecular.
Clasificación de las técnicas cromatográficas
1. De acuerdo con la forma del lecho cromatográfico:
1.1 Cromatografía plana
Se realiza sobre papel u otro material sólido. Suele llamarse “en capa fina” o “en capa delgada” porque la fase estacionaria recubre un soporte plano y rígido.
Cromatografía ascendente en capa fina
Disposiciones experimentales para realizaruna cromatografía en papel descendente (izqda.) y ascendente (dcha.).


Cromatografía ascendente en capa fina: colocación de una muestra (con 3 componentes), desarrollo de la cromatografía y revelado del cromatograma.
 
Rf es el factor de retardo o retraso, que mide la movilidad relativa de cada componente con respecto al máximo posible, la distancia recorrida por el frente de fase móvil.Componente 1: Rf = a / D
Componente 2: Rf = b / D 
Componente 3: Rf = c / D

1: aplicación de la muestra 
2: se sumerge el extremo inferior en la fase móvil 
3 a 5: la fase móvil asciende por capilaridad y se va produciendo la separación de los componentes 
6: se marca el frente de avance del disolvente y se deja secar la placa
7: revelado de los componentes ya separados y medida de su avance1.2 Cromatografía en columna
F.M. líquida, F.E. sólida: columnas de varios mm de diámetro y varios cm de longitud.
F.M. gas, F.E. sólida: columnas de unos 5 mm de diámetro y 1-20 m de longitud.
F.M. gas, F.E. líquida: columnas “capilares”, con menor diámetro y 30-100 m (incluso más) de longitud.
Puede verse una animación del avance de las moléculas por la columna.

Funcionamiento de unacolumna, mostrando la carga de la muestra y diversos momentos a lo largo de la elución:
1. Muestra depositada sobre el lecho cromatográfico
2. La muestra penetra en el lecho
3. Se añade fase móvil
4. Comienza la separación de los componentes de la muestra
1. Eluye el primer componente
1. Eluye el segundo componente
2. De acuerdo con el estado físico de las fases
 
 
fase móvil
 
 líquida
gaseosa
 
 
“cromatografía
líquida”
“cromatografía
de gases”
fase
estacionaria
sólida
Cromatografía
líquido-sólido
Cromatografía
gas-sólido

líquida
Cromatografía
líquido-líquido
Cromatografía
gas-líquido
2.1 Cromatografía de gases
Con fase móvil gaseosa.
Cromatografía gas-líquido
Cromatografía gas-sólido
2.2 Cromatografía líquida
Con fase móvil líquida.
Cromatografíalíquido-líquido
Cromatografía líquido-sólido
2.2.1 HPLC
Cromatografía líquida de alta presión o de alta eficacia (cuando se emplean particulas de fase estacionaria muy pequeñas y una presión de entrada relativamente alta). 
[HPLC, de High Pressure Liquid Chromatography / High Performance Liquid Chromatography]
3. De acuerdo con el mecanismo de separación
Nota: Ésta es una clasificaciónconceptual; en la práctica, el mecanismo que rige la separación puede ser mixto; p.ej., adsorción+reparto.
3.1 Cromatografía de adsorción
(atención: es adsorción, no absorción)
Diferente afinidad de adsorción de los componentes de la muestra sobre la superficie de un sólido activo. La adsorción es la capacidad de las superficies para fijar moléculas.
La F.E. es siempre sólida. Ejemplos: alúmina,...