LA LEVADURA

ASIGNATURA: PROCESOS BIOTECNOLÓGICOS
TRABAJO PRÁCTICO: Adsorción de azul de metileno en levaduras de Saccaromyces cerevisiae.

OBJETIVO
Determinar la cinética de bioadsorción del colorante azul de metileno (AM), utilizando células
no viables de levadura Saccaromyces cerevisiae”

METODOLOGÍA DE TRABAJO
1. MATERIALES
- Biomasa (adsorbente): Levadura de cerveza (Saccharomyces cerevisiae)deshidratada de origen
comercial (Virgen, CALSA).
- Colorante Azul de Metileno (AM) (adsorbato). Solución Madre de Azul de Metileno 500 mg/L.
- Espectrofotómetro

- Moscas

- Cubeta visible

- Agitador múltiple

- Probetas 100 y 1000 mL

- Centrifuga

- Frascos tapa azul (biorreactores)

- Eppendorf

- Micropipetas (2-20 uL)

- Balanza

2. METODOLOGÍA
2.1. Tratamientos de labiomasa
Se ensayará un tratamiento químico a la biomasa, con el objetivo de incrementar la capacidad de
fijación del AM.
- Tratamiento oxidante con KMnO4: Mezclar 20 g de células de levadura seca con 250 mL de
solución acuosa de KMnO4 60 mM y agitar durante 20 minutos.
Luego del tratamiento separar la biomasa tratada por centrifugación a 2.000 g durante 5 minutos,
lavar varias veces con aguadestilada en ciclos de resuspensión – centrifugación. Luego secar la
biomasa en estufa a 60°C hasta peso constante (durante 24 hs).
- Levaduras ST (sin tratar): Para la biomasa referida como “sin tratar” (ST) suspender en agua
destilada y luego secar en estufa en iguales condiciones que en el tratamiento anterior.
En cada caso triturar el sólido seco resultante en mortero y tamizar en mallaN° 30, abertura 590
micrón.
2.2. Curva de calibración

1

De la solución madre de azul de metileno 500 mg/L preparar una dilución 1/50 (tubo N°1:
10 mg/L) y proceder a realizar diluciones seriadas al ½ del mismo:
Dilución

[AM] (mg/L)

1

-

2

H20 (mL)

Solución anterior (mL)

10

-

-

1/2

5

2

2

3

1/4

2,5

2

2

4

1/8

1,25

2

2

51/16

0,625

2

2

6

1/32

0,3125

2

2

7

1/64

0,1563

2

2

8

1/128

0,0781

2

2

TUBO



Fijar la longitud de onda en 661 nm.



Colocar agua destilada en la cubeta y realizar el blanco de absorbancia.



Medir la Abs en orden creciente de concentración.



Graficar Abs 661 nm vs. [AM]. Obtener la ecuación de la recta de ajustepara el rango de
concentraciones que corresponda.

2.3. Modelos cinéticos del proceso de adsorción
Para la aplicación práctica de la biosorción en el tratamiento de efluentes, resulta
fundamental conocer las variables que gobiernan la velocidad del proceso.
La velocidad global de la adsorción depende de dos factores: la velocidad a la que se
transfiere el soluto desde el líquido al sólidomediante mecanismos de transferencia de materia y
la velocidad del proceso de adhesión o de bioadsorción en sí mismo.

2

I.

Transferencia del adsorbato desde el seno del líquido hasta la película limitante que rodea
a la partícula. La película limitante es la capa de líquido que rodea a cada partícula de
biomasa. Se considera prácticamente estancada, con poca o ninguna convección dellíquido, de forma que el movimiento de adsorbato se da por difusión.

II.

Difusión a través de la película limitante.

III.

Transferencia a través del líquido en el gel formado por la red hidratada de biopolímeros
(polisacáridos, etc.) de la partícula.

IV.

Fijación del adsorbato sobre la biomasa.

Para la aplicación práctica de la biosorción en el tratamiento de efluentes, resultafundamental conocer las variables que gobiernan la velocidad del proceso.
La velocidad global de la adsorción depende de dos factores: la velocidad a la que se
transfiere el soluto desde el líquido al sólido mediante mecanismos de transferencia de materia y
la velocidad del proceso de adhesión o de bioadsorción en sí mismo.
1.

Transferencia del adsorbato desde el seno del líquido hasta...