La Reacci N En Cadena De La Polimerasa

La Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) se basa en el mecanismo de la replicación in vivo del ADN: el ADN bicatenario se desenrolla y pasa a ADN monocatenario, se duplica y se vuelve aenrollar. Esta técnica consiste en ciclos repetitivos de: • desnaturalización del ADN por fusión a temperatura elevada, a fin de convertir el ADN bicatenario en ADN monocatenario; • unión (anillamiento) dedos oligonucleótidos, utilizados como cebadores, al ADN diana; • extensión de la cadena de ADN por adición de nucleótidos a partir de los cebadores utilizando ADN polimerasa como catalizador, enpresencia de iones Mg2+. Los oligonucleótidos consisten normalmente en secuencias relativamente cortas, que son diferentes entre sí y complementarias de los sitios de reconocimiento que flanquean elsegmento de ADN vegetal o animal que debe amplificarse. Las fases de desnaturalización del ADN molde, anillamiento del cebador y extensión del cebador constituyen un «ciclo» del método de amplificaciónpor PCR. Hay tres fases principales del proceso de amplificación por PCR (desnaturalización del ADN molde, anillamiento del cebador y extensión) La Reacción en Cadena de la polimerasa (PCR) permiteobtener más de 10 millones de copias de una cadena de ADN de interés a partir de pocas moléculas de ésta. La sensibilidad de ésta técnica requiere de cuidados para que la muestra no esté contaminadapreviamente con otras cadenas de ADN que pudieran generar amplificados.
Para detectar los productos obtenidos después de varios de los procedimientos realizados en un laboratorio molecular, como son:extracción de ADN, cortes con enzimas de restricción y amplificación de ADN mediante PCR se requiere la utilización de la electroforesis como metodología analítica que permite visualizar estosproductos. La electroforesis es un procedimiento en el cual una partícula cargada se hace desplazar a través de un medio aplicando un campo eléctrico. Por lo tanto, esta permite que macromoléculas como...