La Reacci N En Cadena De La Polimerasa

La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica "in vitro" que imita la habilidad natural de la célula de duplicar el ADN.
Se trata de una técnica usada paracrear un gran número de copias de un segmento de ADN, que utiliza ciclos de desnaturalización, apareamiento con cebadores y extensión por una ADN polimerasa termoresistente.DESNATURALIZACION
Mediante un calentamiento a 94°C, el ADN de doble cadena logra que sus cadenas se separen o desnaturalicen. Actividad de la enzima que decrece de manera muyrápida a partir de los 95°C, por lo que a estas temperaturas es aconsejable disminuir el tiempo de incubación
Se rompen los puentes de hidrogeno y las bases nitrogenadasquedan expuestas.
ALINEAMIENTO
Durante el alineamiento, la temperatura de incubación se reduce para permitir el apareamiento de las bases de ambos cebadores en el sitio dondeencuentran una secuencia complementaria.
Se añaden los nucleótidos en el hidroxilo 3’ terminal del iniciador ya apareado al sitio blanco de la amplificación. Mientras que uncebador es complementario al extramo 5’ de la regiom del ADN molde a amplificar.
ELONGACION
Durante la fase de elongación, la mezcla se calienta a 72ºC y la enzima Taq ADNpolimerasa se usa para replicar las hebras de DNA. La Taq polimerasa comienza el proceso de extensión de la cadena complementaria a partir del extremo 3’ de los cebadores. Alfinalizar cada ciclo, la cantidad de ADN molde disponible para el ciclo siguiente aumenta al doble.
ELONGACION FINAL
Al finalizar todos los ciclos se realiza un ultimoalargamiento por 5 minutos a 72°C, para asegurarse que todos los productos de amplificación estén completamente terminados y tengan, por ende, exactamente la misma longitud.