La tinción de ziehl neelsen

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Desde el descubrimiento del agente causal de la tuberculosis por Robert Koch, el Mycobacterium tuberculosis ha sido uno de los organismos vivos más estudiado. Como todas las micobacterias, pertenece al grupo de los bacilos ácido- alcohol resistentes, y es pariente cercano de Mycobacterium leprae, causante de la lepra. La tuberculosis sigue siendo una enfermedad que se cobra gran cantidad devidas cada día, desde hace siglos. En 2008 se registraron en España 5,629 casos declarados de tuberculosis. A nivel mundial, en 2006 se registraron 9,2 millones de casos nuevos, con 1,5 millones de fallecidos[1].

Recientemente se ha descubierto que la estructura de la pared bacteriana de los bacilos ácido-alcohol resistentes es más compleja de lo que se creía. Esta estructura constituyeuna extraordinaria y eficiente barrera de permeabilidad que contribuye a la alta resistencia intrinseca de las micobacterias a agentes nocivos y determinadas drogas. Del mismo modo, resiste la penetración de los colorantes y la acción de los ácidos, característica que nos ha servido para diferenciar estas bacterias de otras morfológicamente similares.
Uno de los pilares del diagnóstico dela tuberculosis es la demostración del bacilo en los tejidos o fluidos del paciente. Una manera rápida de hacer esto es mediante la tinción de Ziehl-Neelsen, que lleva en uso más de cien años, a lo largo de los cuales ha sufrido numerosas mejoras y modificaciones. A pesar de su larga historia, no ha consentido ser desplazada por otros métodos más específicos y caros : es una técnica económica,sencilla, y si se realiza correctamente, fiable. Su objetivo es dar una primera aproximación diagnóstica, que luego puede ser confirmada o descartada mediante otros métodos.
A finales del siglo XIX, Koch, Ehrlich, Ziehl, Neelsen y muchos otros, eran conscientes de la importancia que tiene el diagnóstico precoz, aunque seguramente se sentirían frustrados al no poder tratar con efectividad loque habían diagnosticado. Pero dedicaron sus esfuerzos a identificar al escurridizo bacilo tuberculoso. De sus trabajos, nació la tinción que hoy llamamos de Ziehl-Neelsen, aunque, como veremos más adelante, y sin ánimo de menospreciar su labor, tanto Ziehl como Neelsen sólo hicieron modificaciones o ligeras mejoras sobre una técnica que otros habían desarrollado.

Sólo 24 años después de sudescubrimiento, la fucsina iba a hacer su entrada triunfal en el mundo de la microbiología y la histopatología gracias al genial Ehrlich. Hasta ese momento, la fucsina básica sólo se había usado como colorante nuclear, sin demasiado éxito.

2.-HISTORIA

La historia de la tinción del bacilo de la tuberculosis comienza con el descubrimiento del bacilo por Robert Koch el 24 de marzode 1882[2]. Probando con decenas de colorantes diferentes en distintos órdenes y combinaciones, y variando la temperatura, al fin dio con un método que revelaba la presencia de una bacteria que parecía estar presente en el esputo en todos los casos de tuberculosis. Su informe Die Aetiologie der Tuberculose aparece publicado el 10 de abril de ese año, y en esta publicación describe el método detinción que ha empleado:
“(…)Las extensiones o secciones se colocan en la solución colorante que está constituida por lo siguiente: 200 cc de agua destilada se mezclan con 1 cc de una solución alcohólica concentrada de azul de metileno, se agita, y luego se le añade 0,2 cc de una solución de NaOH al 10%, agitando repetidamente (…) Los materiales para teñir permanecen en esta solución durante20 a 24 horas. Calentando la solución a 40ºC en un baño de agua caliente este tiempo puede acortarse a media hora o una hora. A continuación las preparaciones se cubren con una solución acuosa concentrada de vesuvina ( pardo Bismarck ) que se filtra siempre antes de usarse, y se lava después con agua destilada durante uno o dos minutos. Cuando las preparaciones se sacan del azul de metileno,...