Lab # 6 reaccion catalitica enzimatica

PRÁCTICA 6.
ESTUDIO CINÉTICO DEL ENZIMA ALFA - AMILASA.
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN, EL pH Y LA TEMPERATURA SOBRE LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA.
FUNDAMENTO TEÓRICO.
Experimento 1: Estudio cinético del enzima α-amilasa.
Introducción a la enzimología.
La cinética enzimática tiene por objeto el estudio de la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas, así como los factoresque en ella influyen y los mecanismos por los cuales transcurren las reacciones enzimáticas. La velocidad de las reacciones enzimáticas se puede medir:
1 Por la cantidad de sustrato que desaparece por unidad de tiempo.
2 Por la cantidad de producto que aparece por unidad de tiempo.
En esta práctica de laboratorio se comprobará la influencia de la concentración del sustrato [S], del enzima [E], elpH y la temperatura (T°C) sobre la velocidad de la reacción catalizada por el enzima α-amilasa salival, sobre los enlaces α-1,4 del almidón. Para ello nos basaremos en la desaparición del almidón por unidad de tiempo, mediante el seguimiento de la reacción de coloreada que produce el mismo, así como sus productos de hidrólisis, con el Iodo en disolución de Ioduro de potasio (Reactivo de Lugol).Dado que el almidón está integrado por dos fracciones, la amilosa y la amilopectina, debe tenerse en cuenta las reacciones que ambas producen (así como sus respectivos productos de hidrólisis) con el reactivo de Lugol:
Cuando se mezclan el almidón (mezcla de amilosa y amilopectina), amilasa salival con yodo, produce un color azul violeta. Mientras que sus productos de hidrólisis, maltosa,glucosa y dextrinas límite con el yodo no producen coloración.
Basándonos en las reacciones anteriores podemos estudiar el efecto que provocan en la cinética enzimática la variación de los factores que en ella influyen: [S], [E], pH y T°C, fundamentalmente. La influencia de la [E] podremos estudiarla midiendo la velocidad de la reacción de la forma ya descrita pero utilizando diferentes [E],manteniendo constante los demás factores. De forma similar se procede con el estudio de la influencia de la [S]. En el caso del estudio de la influencia del pH y la temperatura se ensayara la actividad del enzima a diferentes valores de pH y T°C con la reacción del Lugol.

TRABAJO INTEGRADO DE LABORATORIO
CONSULTAS PREVIAS.
1 ¿Cuáles son las características estructurales del almidón?
2 ¿Qué tipo deenzima es la α-amilasa salival?
3 ¿Cuáles son los productos que origina la acción de este enzima sobre el almidón?
4 Explique cómo influyen en la velocidad de las reacciones enzimáticas una variación en la concentración del enzima presente, en la concentración del sustrato, el pH y la temperatura.
5 ¿Qué tipo de reacción se debe dar entre el lugol y el almidón y de qué forma a través de éstareacción se puede determinar la presencia o ausencia de almidón?
6 ¿Cuál es el producto o productos de la reacción de degradación del almidón por el enzima?
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.
Objetivos.
Al finalizar la práctica el estudiante debe estar en capacidad de demostrar que:
1 Reconoce y diferencia los factores que afectan la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas.
2 Ilustra elmecanismo por el cual ciertos factores afectan la velocidad de las reacciones enzimáticas.
3 Utiliza aquellos factores que afectan la velocidad de las reacciones enzimáticas para comprender cómo se regula el trabajo de las enzimas en los organismos biológicos.
4 Discute los efectos de las variaciones bruscas de factores como temperatura, pH en el funcionamiento adecuado de los organismos.Materiales y reactivos
Cantidad Equipos y materiales Cantidad Muestras a analizar y reactivos
1 Gradilla Agua destilada
30 tubos de ensayo (16 x 125 mm) 500mL Solución del enzima: Se prepara colectando 1 mL de saliva (previo enjuague de la boca con agua destilada) y diluyéndolo hasta 20 mL con agua destilada. O una
Solución de α-amilasa comercial 5000 unidades SKB 0,6 g/100ml y diluir 1/100
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