Lab Biocel 2

Objetivos

Comprender el funcionamiento de la cromatografía de exclusión molecular y observar su eficacia en la separacion de moleculas por tamaño.
Conocer losfundamentos teoricos de la electroforesis en gel de poliacrilamida.
Conocer las distintas etapas de esta técnica.
Aplicar esta técnica en el estudio de un problema.Metodologia

Se colocó la placa con el gel en la cámara y se llenó con una solucion buffer. Se retiró la peineta y se llenó el primer bolsillo con un standar, luego sefue alternando entre muestras de tejido de riñon y muscular. Se conectó la cámara a una fuente de poder y se aplico una corriente de 150 V. Se esperó que el frente demigración llegara al extremo del gel y se cortó la corriente. Se separó el gel de las placas de vidrio. Se desechó el gel concentrador y se cubrió el gel separador enuna solución de azul de Commassie. Se colocó el gel en agitacion suave por 15 minutos. Se volvío a cubrir el gel con tinción, las veces necesarias hasta que sevisualizaron las bandas. Se registró lo observado.

Se preparó una solucion de 250 μL de rojo fenol y 250 μL de azul dextrano. Se midió la absorbancia de la solución para504 nm y 630nm. Se empaquetó la columna de cromatografia en una jeringa con aguja y sin embolo. Se vertió la solución en la columna y se mantuvo hidratada agregandovolumenes de agua destilada de 1 mL. Cuando se observó que el liquido que goteaba no era totalmente incoloro, se comenzo a recolectar fracciones de 500 μL. Se midióla absorbancia de cada fracción, la primera mitad para 504 nm y la segunda mitad para 630 nm, teniendo en cuenta calibrar entre mediciones con agua destilada.