lab N 1 de bioquimica

Universidad Andrés Bello
Facultad de Ciencias Exactas
Departamento de Ciencias Biológicas



Determinación de proteínas







INTRODUCCION

Las proteínas son moléculas de gran tamaño que estánconstituidas por una serie de aminoácidos. Existen 20 aminoácidos que son sintetizados por el ser humano los cuales se combinan mediante un enlace peptídico con formación de una molécula de agua.Existen cuatro tipos de estructuras de proteínas; La estructura primaria, siendo una cadena lineal de aminoácidos, la secundaria, correspondiente al plegamiento de la estructura secundaria, la terciarialas cuales poseen un puente disulfuro, enlace característico de esta estructura y la cuaternaria se tiene que formar con estructuras terciarias que se unen por puentes disulfuro, lo que le da laespecificidad a la macromolécula.
Estas estructuras se desnaturalizan con los cambios de temperatura y pH, estos cambios son irreversibles para la proteína.
Los reactivos que determinan proteínas es elBiuret que tiene una de absorción de 540nm, el cual forma un complejo de coordinación entre el Cu2+ y los nitrógenos del enlace peptídico, pasando de una coloración azul a una de color violeta, el otroreactivo utilizado en este laboratorio fue el Bradford el cual da un color azul ante la presencia de proteínas con absorción en 595 nm.

Objetivos
Aprender la utilización del espectrofotómetro y elcorrecto manejo de las micro pipetas.
Determinar la concentración de la muestra problema (BSA)
Conocer los reactivos necesarios para la determinación de proteínas y los cambios que estos producen enpresencia de estas.





Materiales y métodos
Materiales:
Se aprendió la correcta utilización de las micro pipetas (P1000, P100 Y P200), para la extracción de las alícuotas correspondientes.

MétodosBiuret: para este experimento ocupamos siete tubos de ensayo rotulados del 1 al 6, el numero 7 contenía la muestra problema. A cada tubo se le agrego los microlitros de albumina (200,400,600,800,1000)...