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Informe Práctica 2 y 3. Extracción de proteínas de origen animal / Análisis de ADN mediante PCR y electroforesis en gel de Agarosa.


Fecha de realización de la práctica: Miércoles, 29 de Marzo.

Fecha de entrega de la práctica: Miércoles, 6 de Abril.


ALUMNO 1: Del Monte Vergara, Álvaro………………………………………………………………..Grupo 12.1

ALUMNA 2:Domínguez de Diego, Marta………………………………………………………………Grupo 12.1

Subgrupo 2
Mesa 9



Asignatura: Bioquímica Estructural

Profesora: Iglesias Fernández, Raquel



Contenido

1. Introducción………………………………………………………………………………………………Página 4

2. Cuestiones……………………..…………………………………………………………………………Páginas 4-9

3. Conclusión…………………………………………………………………………………………………Página 9











Introducción

En esta práctica serealizarán dos estudios diferentes. Por una parte, tendremos el análisis de los componentes proteicos de diferentes tejidos procedentes de carne de dos pescados diferentes (merluza y salmón). Mientras que por otra parte, tendremos el análisis del peso molecular de los pares de bases de cada uno de nosotros mediante una electroforesis en gel de agarosa tras una PCR.


Cuestiones:

PRÁCTICA 2. EXTRACCIÓN DEPROTEÍNAS DE ORIGEN ANIMAL

1. ¿Qué patrón electroforético observas para cada tipo de muestra? Conociendo el tamaño del marcador de peso molecular que hemos utilizado en nuestros geles, calcular el peso aproximado de las proteínas mayoritarias de cada extracto de planta y pescado.

Para calcular el peso molecular de las proteínas presentes en nuestros extractos de pescado, se mide la distancia enmilímetros que hay desde el pocillo hasta la banda de proteína en el gel obtenido en esta práctica. Sabiendo que la distancia es inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular (log PM), se realiza una recta patrón mediante la información obtenida de las proteínas de peso molecular conocido (bandas del marcador de peso molecular usado en nuestro GEL).



PM (KDa)
Log PM
Distanciamigración
180
2,55
0,443
135
2,13
0,469
100
2,00
0,50
75
1,875
0,533
63
1,799
0,555
48
1,681
0,595
35
1,544
0,648
25
1,398
0,715
20
1,301
0,796
11
1,04
0,96











La distancia de migración (eje de abscisas) frente al Log PM (eje de ordenadas) se representan en una gráfica. En dicha gráfica se calcularán los pesos moleculares aproximados de nuestras “proteínas problema”.






A pesar de que elpatrón electroforético de ambas muestras es similar, vamos a encontrar diferencias entre ellas debido a que, a pesar de tratarse de las mismas proteínas, el tamaño de las mismas es diferencia en cada pescado:

Salmón: si analizamos los resultados obtenidas para la muestra de salmón, podemos comprobar la existencia de una banda mayoritaria en la que hay gran acumulación de proteínas con un PMsimilar de aproximadamente 35-48 kDa.
Además, podemos observar algunas otras bandas ligeramente más gruesas que las demás que recogen proteínas con pesos moleculares de 25 kDa, 75 kDa y 100 kDa.
Merluza: encontramos una gran banda, similar a la de salmón, que corresponde a un PM entre 35-48 kDa. También aparecen otras tres, menos gruesas que la anterior pero también mayoritarias, con PM 11, 63 y 100kDa.


2. Indica los pesos moleculares (PM) de las diferentes muestras analizadas:

MUESTRA
Distancia de migración (mm)
PM
SALMON-ACTINA
0,657
38
SALMON-MIOSINA
0,525
85
MERLUZA-ACTINA
0,63
40
MERLUZA-MIOSINA
0,521
90




















3. Brevemente explicar ¿Qué diferencias observas en las muestras de pescado?

Como hemos podido comprobar, las proteínas de la merluza son ligeramente mayoresque las del salmón.
Es por esta razón que las bandas del salmón estén dispuestas un poco más bajas que las de la merluza, pues las proteínas de mayor peso molecular, recorren menor distancia de migración.


4. Brevemente explicar ¿Qué resultado esperarías de una electroforesis que se nos olvidó tratar las muestras con SDS y β-mercaptoetanol?

El SDS es un detergente aniónico que se une a las...