Laboratorio Bioquimica II
Páginas: 5 (1192 palabras)
Publicado: 30 de septiembre de 2015
Informe de Laboratorio N°2
“Cuantificación Espectrofotométrica de Aminoácidos y Proteínas”
Bioquímica
Nombres: Morales, Sebastián
Ulloa, Bárbara
Profesor: Muñoz, Claudia
Ayudante: Gangas, María Victoria
Sección: 2.1
13/Abril/2015
Introducción:
Las proteínas constituyen un grupo de biomoléculas caracterizado por su gran variedad estructural y enorme diversidad defunciones biológicas. Sin embargo, todas las proteínas tienen en común ser polímeros de aminoácidos, ordenados en secuencia lineal.1
La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones biológicas. Mediante el espectrofotómetro se obtiene una medida del valor de la absorbancia de una muestra a determinada longitud de onda.
La medida de la absorción de la luz seutiliza para detectar e identificar moléculas y para medir su concentración en solución. La fracción de la luz incidente absorbida por una solución a una longitud de onda determinada está relacionada con el espesor de la capa absorbente.2 Estas dos relaciones están combinadas en la Ley de Lambert-Beer, que indica la proporcionalidad directa entre la absorbancia y la concentración. Y se expresa:
DondeDO es la densidad óptica o absorbancia de la sustancia, E es el coeficiente de extinción molar, c es la concentración y I es el espesor de la celda utilizada para la medición, siendo este ultimo igual a 1 cm.3
Objetivos:
Determinar la concentración de proteínas por el método de Lambert-Beer.
Familiarizarse con las técnicas de espectrofotometría y poder manejarlas en relación a la práctica.Procedimiento experimental:
Se comenzó el práctico, completando 4 tubos con distintas soluciones, las cuales fueron NaCl 0,9% p/v, Glicina, Triptófano y SAB, en la cual la medida de cada solución fue de 3 ml. Luego se vertieron las soluciones en cubetas de cuarzo, previamente fueron limpiadas con agua destilada y así ser ingresadas al espectrofotómetro y medir la absorbancia de cada reactivo, paraposteriormente determinar las concentraciones de las soluciones problemas, es decir, el triptófano y Seroalbumina de bovino
Resultados:
De las 4 muestras analizadas en el práctico, una de ellas era la muestra blanco, la cual poseía una absorbancia de 0 nm, esta muestra fue la de NaCl 0,9% p/v. La segunda muestra fue la Glicina la que arrojo una absorbancia de 0 nm al igual que el NaCl, siguiendocon la muestra de Triptófano que tuvo una absorbancia de 0,700 nm, terminando con la muestra de SAB, la cual tuvo una absorbancia de 0,639 nm. Luego de obtener los resultados de absorbancia se procedió a calcular la concentración del aminoácido o proteína por medio de la ley de Lambert-Beer y este fue transformado a mg/ml, donde el triptófano poseía una concentración de 0.075mg/ml mientras que laSeroalbumina de bovino tenía una concentración de 2.907mg/ml (ver anexo 1).
Discusión:
La principal característica que le otorga absorbancia a los diferentes aminoácidos es su cadena lateral aromática. Los electrones que se encuentran en esta cadena se excitarán a medida que pasa la luz, haciendo que dichos electrones absorban los fotones de luz provenientes del espectrofotómetro,entregando así un valor respectivo de absorbancia.4
La glicina es un aminoácido cuyo radical es un hidrógeno 5. A consecuencia de esto, el espectrofotómetro entrega un valor casi nulo de absorbancia. Esto se debe a que en su grupo R, presenta un hidrógeno por lo que al no poseer enlaces peptídicos como en el caso de la SAB o anillos aromáticos como en el caso del triptófano, la glicina no posee lacapacidad de absorber la luz ultravioleta a 280 nm.5
Por otro lado, tanto el Triptófano como la SAB poseen en su cadena lateral un grupo aromático 6, donde el SAB, que presento una absorbancia de 0,639 debido a que es una proteína conformada por distintos tipos de aminoácidos, dentro de los cuales se pueden encontrar posiblemente aminoácidos con anillos aromáticos que puedan absorber a una longitud...
Informe de Laboratorio N°2
“Cuantificación Espectrofotométrica de Aminoácidos y Proteínas”
Bioquímica
Nombres: Morales, Sebastián
Ulloa, Bárbara
Profesor: Muñoz, Claudia
Ayudante: Gangas, María Victoria
Sección: 2.1
13/Abril/2015
Introducción:
Las proteínas constituyen un grupo de biomoléculas caracterizado por su gran variedad estructural y enorme diversidad defunciones biológicas. Sin embargo, todas las proteínas tienen en común ser polímeros de aminoácidos, ordenados en secuencia lineal.1
La espectrofotometría es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones biológicas. Mediante el espectrofotómetro se obtiene una medida del valor de la absorbancia de una muestra a determinada longitud de onda.
La medida de la absorción de la luz seutiliza para detectar e identificar moléculas y para medir su concentración en solución. La fracción de la luz incidente absorbida por una solución a una longitud de onda determinada está relacionada con el espesor de la capa absorbente.2 Estas dos relaciones están combinadas en la Ley de Lambert-Beer, que indica la proporcionalidad directa entre la absorbancia y la concentración. Y se expresa:
DondeDO es la densidad óptica o absorbancia de la sustancia, E es el coeficiente de extinción molar, c es la concentración y I es el espesor de la celda utilizada para la medición, siendo este ultimo igual a 1 cm.3
Objetivos:
Determinar la concentración de proteínas por el método de Lambert-Beer.
Familiarizarse con las técnicas de espectrofotometría y poder manejarlas en relación a la práctica.Procedimiento experimental:
Se comenzó el práctico, completando 4 tubos con distintas soluciones, las cuales fueron NaCl 0,9% p/v, Glicina, Triptófano y SAB, en la cual la medida de cada solución fue de 3 ml. Luego se vertieron las soluciones en cubetas de cuarzo, previamente fueron limpiadas con agua destilada y así ser ingresadas al espectrofotómetro y medir la absorbancia de cada reactivo, paraposteriormente determinar las concentraciones de las soluciones problemas, es decir, el triptófano y Seroalbumina de bovino
Resultados:
De las 4 muestras analizadas en el práctico, una de ellas era la muestra blanco, la cual poseía una absorbancia de 0 nm, esta muestra fue la de NaCl 0,9% p/v. La segunda muestra fue la Glicina la que arrojo una absorbancia de 0 nm al igual que el NaCl, siguiendocon la muestra de Triptófano que tuvo una absorbancia de 0,700 nm, terminando con la muestra de SAB, la cual tuvo una absorbancia de 0,639 nm. Luego de obtener los resultados de absorbancia se procedió a calcular la concentración del aminoácido o proteína por medio de la ley de Lambert-Beer y este fue transformado a mg/ml, donde el triptófano poseía una concentración de 0.075mg/ml mientras que laSeroalbumina de bovino tenía una concentración de 2.907mg/ml (ver anexo 1).
Discusión:
La principal característica que le otorga absorbancia a los diferentes aminoácidos es su cadena lateral aromática. Los electrones que se encuentran en esta cadena se excitarán a medida que pasa la luz, haciendo que dichos electrones absorban los fotones de luz provenientes del espectrofotómetro,entregando así un valor respectivo de absorbancia.4
La glicina es un aminoácido cuyo radical es un hidrógeno 5. A consecuencia de esto, el espectrofotómetro entrega un valor casi nulo de absorbancia. Esto se debe a que en su grupo R, presenta un hidrógeno por lo que al no poseer enlaces peptídicos como en el caso de la SAB o anillos aromáticos como en el caso del triptófano, la glicina no posee lacapacidad de absorber la luz ultravioleta a 280 nm.5
Por otro lado, tanto el Triptófano como la SAB poseen en su cadena lateral un grupo aromático 6, donde el SAB, que presento una absorbancia de 0,639 debido a que es una proteína conformada por distintos tipos de aminoácidos, dentro de los cuales se pueden encontrar posiblemente aminoácidos con anillos aromáticos que puedan absorber a una longitud...
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