Laboratorio Ciclo De Krebs

Lab. Bioquímica General

METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS CICLO DE KREBS
INTRODUCCIÓN
Todos los seres vivos requieren un continuo aporte de nutrientes para suplir sus necesidades de materia y
energía. Elprincipal nutriente de la célula es la glucosa, la que es catabolizada para producir ATP, la forma más importante
de energía utilizable en la célula. El metabolismo de la glucosa ocurre a través deuna serie de reacciones:

Glu cos a  Piruvato ATP  NADH  H 

Glicólisis:
Ciclo de Krebs:

AcetilCoA CO2  NADH  H   FADH 2  ATP
NADH  H   FADH 2  O2  ATP  H 2 O

Cadena respiratoria:Respiración aeróbica en corazón o hígado de rata
La deshidrogenada succínica es una enzima del ciclo de Krebs, que cataliza la oxidación de ácido succínico a
+

ácido fumárico. Usando FAD comocoenzima. Esta enzima es especifica para el ácido succínico, pero puede ser inhibida
competitivamente por el ácido malónico.
+

En sistemas de ensayo con extractos de tejido, se puede utilizar azul demetileno como aceptor de electrones de H el cual
en estado oxidado es azul y en estado reducido es incoloro. Por lo tanto se puede reconocer la actividad enzimática por la
decoloración del azul de metilenoen ausencia de oxígeno, ya que el oxígeno del aire re-oxida el azul de metileno.

OBJETIVOS
1.
Observar experimentalmente los fenómenos de respiración celular aeróbica en extractos de tejidos.
2.Comprobar el efecto de inhibidores de la glicólisis y de la respiración celular.
3.
Aplicar los conceptos de sustrato, inhibidores competitivos, inhibidores no competitivos, oxido-reducción,
modificaciónde pH e inhibidores en la interpretación de sus resultados.
ACTIVIDADES
1. Complete la siguiente batería de tubos.
Tubos
Tampón fosfato
Preparación enzima
Glucosa 0,1 M
Succinato 0,1 M
Malonato 0,1 MKCN 0,05 M

1
4 mL
1 mL

2
2 mL
1 mL
1 mL
1 mL

3
2 mL
1 mL
1 mL
1 mL

4
2 mL
1 mL
1 mL
0,5 mL
0,5 mL

5
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL

Nota: Agregar KCN con propipeta, NO USE LA BOCA PARA PIPETEARLO.
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