Laboratorio clinico

INMUNOFLUORESCENCIA

Que es la fluorescencia?

…..Es la propiedad de una sustancia de emitir
luz cuando es expuesta a radiaciones de baja longitud de onda y alta energía (UV – Rx). Lasradiaciones absorbidas (invisibles al ojo), son transformadas en luz visible, o sea de una longitud de onda mayor a la incidente.

Como se produce la fluorescencia?
La absorción de luz por parte de lamolécula de fluorocromo la eleva a un estado de exitación en el cual contiene mayor energía. La molécula permanece en el estado de exitación por un período de tiempo muy corto. El retorno a un nivel deenergía menor es acompañado por emisión de luz (fluorescencia)

Inmunofluorescencia Directa
El procedimiento se realiza en un paso básico de reacción. La muestra clínica que presuntamente contieneantígenos del microorganismo bajo estudio es puesta en contacto con un anticuerpo monoclonal dirigido contra dicho microorganismo conjugado con fluoresceína. Si el antígeno esperado está presente seformará un complejo antígeno-anticuerpo. La reacción positiva en forma de fluorescencia verde manzana puede verse con la ayuda de un microscopio de fluorescencia.

Esquema de la técnicaInmunofluorescencia Indirecta
Es una técnica de doble capa en donde se aplica el anticuerpo sin marcar directamente sobre el sustrato de tejido y se visualiza por tratamiento con un suero anti-inmunoglobulinaconjugado con fluorocromo El proceso consta de dos etapas: Primera etapa: se fijan sobre un portaobjetos los antígenos que constituyen el substrato conocido específico (células que contiene virus, T.gondii, T. pallidum, etc.) sobre él se coloca el suero de quien se sospecha la presencia de anticuerpos específicos, si la reacción es positiva se dará formación de complejo antígeno-anticuerpo novisible ya que el anticuerpo no estaba marcado Segunda etapa: se agrega una anti-inmunoglobulina humana marcada, que reaccionará con el anticuerpo del complejo producido en la primera etapa....