Laboratorio Cultivo In Vitro Vegetales

UNIVERSIDAD POLITÉCNICA SALESIANA
FACULTAD: CIENCIAS AGROPECUARIAS Y AMBIENTALES
INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA DE LOS RECURSOS NATURALES
ASIGNATURA: BITECNOLOGÍA VEGETAL I
PROFESOR: DR. MARCO CERNA (BIOLOGO)

Diseño de un laboratorio para cultivo de tejidos vegetales
Un laboratorio con el propósito de manejar tejidos vegetales debe prestar condiciones físicas y químicas que ayuden a lascélulas a expresar su potencial intrínseco o inducido, para lo cual se deben adoptar procedimientos de asepsia para evitar la contaminación microbiana.
Con estos propósitos se recomiende que el laboratorio tenga la siguiente organización:
Grafico # 1 Áreas de un laboratorio de cultivo de tejidos
[pic]

Un laboratorio de cultivo de tejidos se puede dividir esquemáticamente en áreas separadaspara las diferentes funciones que se desarrollan, en la práctica, sin embargo, algunas de las funciones pueden desarrollarse en un mismo ambiente (Roca y Mroginski, 1991).

Área de preparación de medios:
Este espacio se utiliza para preparar medios de cultivo, almacenamiento de materiales de vidrio, plástico y reactivos químicos, en este lugar deben existir mesas de trabajo para preparar mediosde cultivo, colocar las balanzas, el medidor de pH, platos de agitación. Deberá haber también vitrinas, estanterías, equipo de refrigeración.
Instalaciones:
- Suministro de gas, agua y electricidad
- Aire acondicionado
- Mesones de trabajo
Mobiliario:
- Taburetes
- Mesas móviles
- Estantería para productos químicos, material de vidrio, etc.
- Estantería estéril para medios decultivo, agua estéril etc.
Materiales:
- Material de vidrio diverso, para volumetría, mezcla, agitación, almacenamiento y calentamiento (pipetas, probetas, buretas, vasos de precipitación, matraces, tubos de ensayo, etc.)
- Espátulas, para utilización durante el pesaje
- Gradillas de metal para mantener los tubos de ensayo en la autoclave.
- Bandejas plásticas; para el traslado de medios ymateriales.
- Material para el cerrado de tubos y matraces (algodón, papel aluminio, película plástica, tapas metálicas, etc.)
- Depósito de agua destilada y / o desionizada
- Mechero Bunsen, o lámpara de alcohol
- Cajas Petri
- Recipientes plásticos para dosificación de reactivos.
- Papel filtro
Equipos:
- Placa caliente con agitador magnético
- Balanza de precisión, graduada enmiligramos (precisión hasta 0,1mg)
- Horno micro-ondas
- Sistema de filtrado Millipore
- Dispensador automático
- PH-metro
- Cronómetro
- Refrigerador y congelador
- Microscopio simple binocular

Reactivos:
Hipoclorito de calcio; para esterilización del material vegetal
Alcohol de 96%
Carbón activado
Componentes de Solución Nutritiva Stock
Vitaminas
Fuente de Carbono: SacarosaGelatinizador: Agar
Reguladores de crecimiento

Área de lavado y esterilización:
Puede estar constituida por dos áreas conectadas entre si, o por un solo ambiente y puede estar localizada dentro del área general de preparación.

El área de lavado debe incluir por lo menos un lavadero grande con agua caliente y agua fría, una fuente de agua de alto grado de pureza, preferiblemente aguadoblemente destilada; para el efecto se debe usar un destilador de vidrio o metal no tóxico y un desionizador de agua colocado entre el destilador y el lavadero. Esta área debe disponer de un espacio para almacenar agua destilada en botellas de plástico o vidrio.
El área de esterilización debe tener espacio para la autoclave. Esta área también puede incluir espacio para estufas, secadores y un lavaderocon agua caliente y fría.
Instalaciones:
- Suministro de gas, agua y electricidad.
- Lavadero grande

Materiales:
- Escurridores
- Lavador de pipetas
- Material de limpieza: escobillas, detergentes, estropajos.
- Depósito de agua destilada y / o desionizada
- Fundas de basura
- Basureros
- Toallas de tela

Equipos:
- Esterilizador seco; para bisturís, escarpelos,...