Laboratorio de equipamiento de laboratorio de cultivo celular

Guía de laboratorio nº 1: Equipamiento y preparación de medios de cultivos

Curso: Cultivo celular
Profesor: Dr. Allisson Astuya
Instructora: Ambbar Aballay

El diseño de un laboratorio destinado a el desarrollo e implementación de cultivos celulares debe disponer de áreas independientes para llevar a cabo la preparación y esterilización de medios y reactivos. Un espacio para el proceso delavado y preparación de material y un área únicamente destinada al trabajo con cultivos celulares. Lo más característico de un laboratorio de cultivo de celular es el mantenimiento de la asepsia. La asepsia es la condición libre de microorganismos que producen enfermedades o infecciones.
En un laboratorio de cultivo celular son necesarias estrictas medidas de bioseguridad, para lo cual esnecesario una infraestructura física básica que debe contar con sistemas de refrigeración y congelación, incubadoras, centrífugas, balanzas, microscopios y cabinas de flujo laminar. Adicionalmente, se debe disponer de un buen suplemento de material plástico y de vidrio y con sistemas de esterilización apropiados para los diferentes tipos de reactivos y material utilizados.

Descripción deequipamiento básico en laboratorio de cultivo celular:

Gabinete de bioseguridad: El gabinete de bioseguridad clase II con flujo horizontal, que se encuentra en nuestro laboratorio, mantiene la esterilidad de los materiales de trabajo y de los cultivos, protegiéndolos del material en suspensión que se encuentra en el ambiente y que de estar en contacto con nuestro cultivo producirá contaminación con hongosy/o bacterias. Adicionalmente protege al operador de posibles escapes de vapores tóxicos, virus, radioisótopos, o cualquier sustancia tóxica con la cual se trabaje.
Previo al uso del gabinete de bioseguridad, este debe ser minuciosamente limpiado y esterilizado por 15min con luz UV, la cual viene incorporada en el gabinete.
Algunas de las clasificaciones de los gabinetes con los cuales setrabaja en cultivo celular son:

Clase I: Protege al operario y al medioambiente
Clase II: Protegen al operario, el cultivo y el medioambiente
Clase III: Cabina de seguridad estanca para trabajo con agentes biológicos de alto riesgo

Bomba peristáltica (bomba de vacío): generalmente esta bomba está conectada al gabinete de bioseguridad, siendo utilizada para aspirar el medio de cultivo u otrosreactivos desde el frasco de cultivo. Estos residuos son colectados directamente en un kitasato que contiene desinfectante, esta misma bomba puede ser utilizada para la filtración de los medios de cultivo.

Baño termorregulado: Un baño capaz de mantener una temperatura constante, necesario para temperar soluciones y medio de cultivo antes de ser utilizados. Preferentemente el agua del bañotermorregulador debe ser cambiado cada 2 días.

Incubador con CO2 : Las células de mamíferos crecen a 37ºC y necesitan cierto grado de humedad, es por esto que se utiliza un incubador con inyección de CO2. Sus dimensiones pueden variar de 50-200L. En el laboratorio se dispone de un incubador con una capacidad de 156L, el cual posee un sistema de recirculación de aire y control de temperatura.
Elincubador debe ser resistente a la corrosión y de fácil limpieza. Muchos incubadores poseen una chaqueta de agua para distribuir el calor uniformemente. El nivel de CO2 se ajusta para mantener equilibrio carbonato-bicarbonato del medio de cultivo, usualmente inyectando un 5% de CO2.

Incubadora de células: Este equipo es similar al incubador con CO2, con la diferencia de que no cuenta con inyecciónde CO2, posee con un sistema de refrigeración, que impide el aumento de la temperatura en el interior de la incubadora, es muy útil para la incubación de células de peces las cuales requieren una temperatura cercana a los 17ºC.

Microscopio Invertido: El seguimiento del estado de un cultivo se realiza mediante un microscopio invertido, el cual se diferencia de un microscopio óptico al poseer la...