Laboratorio de fisiologia microbiana-factores que afectan el crecimiento microbiano

Objetivos
* Analizar el efecto de la edad del cultivo sobre la fisiología microbiana, específicamente su actividad enzimática, usando un cultivo de E. coli.

* Reconocer la medición de los productos de la catálisis enzimática microbiana (Indol), como una estrategia útil para el análisis de la fisiología de las poblaciones microbianas.

* Evaluar la tasa de producción de Indol y latasa específica de producción, y posteriormente establecer la diferencia entre ellas.

Resultados
Tabla 1. Resultados de las Absorbancias de la densidad celular y cuantificación de indol para cada cultivo a 600 y 540nm respectivamente.
Cultivo | Densidad Celular | Cuantificación de Indol (ABS a 540nm) |
| ABS(600nm) | Tubo2(10min) | Tubo3(10min) | Tubo4(25mn) | Tubo5(25min) | Tubo6(35min) |Tubo7(35min) |
E1 | 0,381 | 0,011 | 0,016 | 0.015 | 0.023 | 0.075 | 0.070 |
E2 | 0,346 | 0,144 | 0.311 | 0.433 | 0.327 | 0.417 | 0.374 |
E3 | 0,461 | 0,017 | 0.107 | 0.139 | 0,140 | 0.176 | 0.168 |
E4 | 0,602 | 0,159 | 0.157 | 0.205 | 0.341 | 0.179 | 0.172 |
E5 | 0,678 | 0,546 | 0.499 | 0.275 | 0.419 | 0.428 | 0.666 |

Tabla2. Resultados de la producción de indol para cada edad delcultivo.
Producción de Indol(mg/L) |
Edad del cultivo (Horas) | tubo 2(10') | tubo 3(10') | tubo 4(25') | tubo 5(25') | tubo 6(35') | tubo 7(35') |
2 | 22 | 25.3 | 24.6 | 30 | 64.6 | 61.3 |
4 | 110.6 | 222 | 303.3 | 232.6 | 292.6 | 264 |
6 | 26 | 86 | 107.3 | 108 | 132 | 126.6 |
8 | 120.6 | 119.3 | 151.3 | 242 | 134 | 129.3 |
24 | 378.6 | 347.3 | 198 | 294 | 333.3 | 458.6 |

Tabla 3.Promedio de la producción de Indol con respecto al tiempo
Edad del Cultivo | Promedio de la producción de Indol (mg/l) |
| Tiempo(10’) | Tiempo(25’) | Tiempo(35’) |
E1 | 23.6 | 27.3 | 63 |
E2 | 166.3 | 96.7 | 278.3 |
E3 | 56 | 107.7 | 129.3 |
E4 | 119.4 | 196.7 | 131.7 |
E5 | 363 | 246 | 396 |

Tabla 4. Medidas de la producción de Indol para cada Edad del Cultivo
Edad delCultivo | Densidad Celular(UFC/mL) | Tasa de producción de Indol | Tasa específica de producción de Indol |
E1(2h) | 3.804*10¹⁰ | 87.9 | 2.310*10⁻9 |
E2(4h) | 3.459*10¹¹ | 225.9 | 6.530*10⁻¹⁰ |
E3(6h) | 4.609*10¹¹ | 176.9 | 3.83*10⁻¹⁰ |
E4(8h) | 6.019*10¹¹ | 59.1 | 9.81*10⁻¹¹ |
E5(24h) | 6.779*10¹¹ | 37.7 | 5.56*10⁻¹¹ |

Gráficas

Gráfica 1. Producción de Indol en función del tiempopara cada Edad del cultivo (E1,E2,E3,E4,E5).







Gráfica 2. Tasa de Producción de Indol en función del tiempo

Gráfica 3. Tasa específica de Producción de Indol con respecto al tiempo

Modelo de Cálculo
1. Calcular la cantidad de Indol en mg/L obtenida en cada tubo a partir del valor de absorbancia, teniendo, en base a la curva de calibración cuya ecuación es: y= 0.0015x-0.022.

* Edad del Cultivo1 (E1), Tubo 2 (0.011ABS) y tiempo(10 min):

Y= 0.0015x- 0.022; donde:
Y= Absorbancia (ABS)
X= Cantidad de Indol en mg/L

Y= 0.0015x- 0.022.
0.011= 0.0015x-0.022
0.011+0.0220.0015=x
22=x

Para el Tubo 2 en el tiempo (10min) hay 22mg/L Indol.

Para calcular la cantidad de indol en los demás tubos para las diferentes edades del cultivo se aplica el mismoproceso descrito anteriormente.

2. Calcular la tasa de producción de Indol para cada edad del cultivo (mg indol/hora), en base a la línea de regresión lineal del gráfico obtenido en la producción de indol con respecto al tiempo.

La tasa de producción de Indol no es más que la pendiente de la gráfica de producción de indol vs. El tiempo. Dichos valores están consignados en la tabla.4.3. Calcular la densidad bacteriana en la suspensión, utilizando la ecuación obtenida en la gráfica de la práctica anterior, donde se relaciona absorbancia con recuento en placa en UFC/mL.

Edad del Cultivo 1, ABS=0.381

La ecuación es: Y= 1*10⁻10x + 0.0058; donde:
Y= Absorbancia (ABS)
X= Densidad en UFC/mL

La ABS de E1, se multiplica por el inverso de su factor de dilución, que para...