laboratorio de lipidos

 Laboratorio de Bioquímica N°4
Extracción, reconocimiento y cromatografía de lípidos


Objetivos de la práctica:
Conocer métodos generales sencillos de extracción, separación e identificación de lípidos.
Comprender las propiedades fisicoquímicas de los lípidos (extracción y solubilidad).
Identificar a través de pruebas bioquímicas los lípidos en las muestras problema.
Entregar al alumnolos reconocimientos básicos para desarrollar análisis en grasas y aceites.

Fundamento Teórico:

Los lípidos comprenden una amplia gama de compuestos insolubles en agua y solubles en solventes orgánicos (éter, acetona, cloroformo, benceno, etc.); estos se pueden identificar puesto que se colorean selectivamente de rojo -anaranjado con el colorante Sudán III. Debido a su insolubilidad en agua,los lípidos presentes en las estructuras biológicas se encuentran generalmente asociados a otras biomoléculas como proteínas e hidratos de carbono.

Por otra parte, aunque los lípidos se consideran sustancias hidrofóbicas o apolares, presentan diferente grado de polaridad. Los triglicéridos totalmente apolares, no tienen ningún grado de interacción con el agua, en tanto que los fosfolípidos sonmoléculas bipolares e interactúan con el agua formando monocapas, bicapas y micelas. El colesterol es también una molécula bipolar debido al grupo OH unido a su anillo esteroidal. Así por ejemplo la acetona extrae principalmente triglicéridos y colesterol, ya que los fosfolípidos son poco solubles en acetona.

Por lo tanto, cualquier método de extracción de lípidos requiere utilizar mezclas desolventes orgánicos que permitan solubilizar todos los lípidos y precipiten proteínas e hidratos de carbono para su mejor separación. Aprovechando la solubilidad diferencial de los lípidos se puede realizar una extracción fraccionada con distintos solventes, lo que permite a la vez la separación de los diferentes lípidos. Las grasas son solubles en disolventes orgánicos, como el éter, cloroformo,acetona, benceno, etc.

Se pueden extraer lípidos totales con una mezcla de metanol:éter (1:1) y separarlos posteriormente por cromatografía de adsorción en capa fina.

La separación de los componentes de una mezcla por cromatografía de adsorción, se basa en:
1. El diferente grado en que cada componente se une o es adsorbido a un soporte sólido (fase estacionaria)
2. La diferentesolubilidad de las sustancias de la mezcla en una combinación de solventes de diferente polaridad, que se hace pasar por el soporte sólido (fase móvil)

El soporte sólido debe ser los suficientemente poderoso (activo) para retener la mayor cantidad de sustancia. Por ejemplo el gel de sílica se utiliza como soporte sólido para sustancias apolares como los lípidos. El grado de adsorción de cada sustanciaes variable, así por ejemplo un fosfolípido con un grupo bastante polar será más retenido que el colesterol libre con un grupo menos polar y éste más retenido que los triglicéridos. De esta manera, el fosfolípido y el colesterol migran más lentamente que los triglicéridos, haciendo posible su separación. Para la identificación de los diferentes lípidos se usan patrones o estándar de la sustanciapura y se reconocen por comparación de sus Rf.


Rf = Distancia recorrida por la sustancia (x) Frente del solvente
Distancia recorrida por el solvente (d)



Punto de aplicación
Por otro lado, una característica interesante de los lípidos es la saponificación. En el proceso de saponificación, las grasas reaccionan en caliente con el hidróxido sódico o potásicodescomponiéndose en los dos elementos que las integran: glicerina y ácidos grasos. Éstos se combinan con los iones sodio o potasio del hidróxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sódicas o potásicas de los ácidos grasos.



En los seres vivos, la hidrólisis de los triglicéridos se realiza mediante la acción de enzimas específicos (lipasas) que dan lugar a la formación de ácidos...