laboratorio electroforesis

Informe de laboratorio
Electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida




Paola Andrea Ochoa Masso
Julieth Tatiana Peña Esquivel






Docente
Andrés Pereañez






Universidad de Antioquia
Facultad de química farmacéutica
Química farmacéutica
Laboratorio de bioquímica
2015-1

Introducción
La presente practica consiste en aprender , comprender y realizar uno de los métodos queposibilita la separación de proteínas, como lo es la electroforesis, la cual permite visualmente presenciar el fenómeno de migración por carga y masa molar de las proteínas hasta la parte inferior de la placa, por ello es fundamental el uso adecuado del gel y las muestras que se van a sembrar (placa), puesto que de allí las concentraciones y demás variables van a influir directamente en la eficaciadel experimento ; en el laboratorio de manera pragmática se realizara la montura necesaria para llevar a cabo la migración de la albumina, es decir la preparación del gel tanto superior como inferior los cuales deben gelificar para obtener el resultado deseado , aparte de ello sembrar la muestra y esperar los resultados obtenidos , teniendo antes la explicación del docente a cargo acerca de losprincipios básicos que inciden en la electroforesis con el fin de comprender los procedimientos a realizar.
El objetivo de esta práctica es adquirir las destrezas necesarias tanto intelectual como experimentalmente para realizar la electroforesis de proteínas en geles de poliacrilamida.












































Marco teórico
Fundamentos de la electroforesis
“La electroforesis esla migración de solutos iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico; estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo (electrodos - y +), en dependencia de una combinación de su carga, peso molecular y estructura tridimensional.
La velocidad de migración electroforética depende de la densidad de carga de la molécula (relación carga / peso), del voltaje aplicado y de la porosidad del gel deelectroforesis. El voltaje no se puede incrementar indiscriminadamente porque se genera un excesivo calor. En contraste, al aplicar bajo voltaje puede ocurrir una pobre separación, por causa de la difusión por tiempo muy prolongado de la corrida electroforética.
Es de destacar que a escala analítica, los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad, poder de resolución y versatilidad, y sirvencomo método de separación de mezclas complejas de ácidos nucleicos, proteínas y otras biomoléculas, donde aportan un potente criterio de pureza. Se pueden conocer también mediante estas técnicas, las características ácido-básicas de las proteínas presentes en un extracto crudo, lo que da la información necesaria si se pretende realizar una separación cromatográfica basada en diferencias de carga.Es útil además para determinar otros parámetros como peso molecular, punto isoeléctrico y número de cadenas polipeptídicas de las proteínas.
La mayoría de las biomacromoléculas (proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos) poseen determinada carga eléctrica con grupos aniónicos y catiónicos capaces de disociarse. La carga neta de la partícula está dada por el pH del medio y puede ser modificadapor la interacción con pequeñas moléculas de iones u otras macromoléculas. De lo anterior se deduce que el pH influye sobre la velocidad de migración de las moléculas. En el punto isoeléctrico de la biomolécula, pH al cual su carga neta es 0, esta no migra. Por debajo del punto isoeléctrico tiene carga neta positiva y migra hacia el cátodo, y por encima del punto isoeléctrico tienen carga netanegativa y migra hacia el ánodo.
La poliacrilamida es un soporte empleado frecuentemente en electroforesis en gel, es químicamente inerte, de propiedades uniformes, capaz de ser preparado de forma rápida y reproducible. Forma, además, geles transparentes con estabilidad mecánica, insolubles en agua, relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante tiempo prolongado....