Laboratorio Enzimas

Universidad Mayor

Curso de Bioquímica para la Carrera de Odontología

Año Académico 2008

TRABAJO PRÁCTICO Nº 4



Enzimas. Cinética de una reacción Enzimática

I Introducción

Lacinética es el estudio de la velocidad con que ocurren las reacciones químicas. Esto es de una enorme importancia práctica ya que a través de los estudios de cinética enzimática podemos:
1. Determinarla afinidad de sustratos e inhibidores a la enzima en estudio. Recordemos que existen terapias que consisten en la administración de inhibidores de la enzima blanco.
2. Dilucidar el mecanismocatalítico de la reacción. Para esto también se necesita información proveniente de estudios químicos y estructurales de la enzima.
3. La mayoría de las enzimas son parte de vías metabólicas. El estudiode la cinética de una reacción enzimática en particular nos lleva al entendimiento del papel de la enzima en el proceso metabólico global.
4. En las condiciones apropiadas la velocidad de unareacción catalizada por enzimas es proporcional a la cantidad de enzima presente. La mayoría de los ensayos enzimáticos se basan en estudios cinéticos de la enzima. La medición de actividad enzimática esuno de los procedimientos más comunes para análisis clínicos.

En este laboratorio, estudiaremos la cinética de la enzima lactato deshidrogenasa (LDH), que cataliza la siguiente reacción:Piruvato + NADH + H+ LDH Lactato + NAD+


II Objetivos

1. Determinar la velocidad inicial de la lactato deshidrogenasa a distintasconcentraciones de sustrato.
2. Construcción de gráficos que permitan determinar la constante de Michaelis-Menten(Km) y la velocidad máxima(Vmax) de la lactato deshidrogenasa.
3. Comprender el origenoperacional de los conceptos de velocidad inicial de reacción, velocidad máxima, actividad enzimática y de los parámetros cinéticos derivados del procesamiento de estos datos.
III Diseño Experimental...