Laboratorio Parasitologia

 
TÉCNICA PARA BÚSQUEDA DE CÉLULAS LE

Materiales:
tubos de macro-hematocrito portas frasquito con 4-8 perlas de vidrio y 1 gota de heparina jeringa con aguja gruesa, de 15 cm de largo embudo
Introducción:
El Lupus Eritematoso Sistémico es una enfermedad autoinmune, que afecta a muchos tejidos y órganos como articulaciones, piel, sistema nervioso, riñón, corazón, pulmón, sangre, hígado,bazo y ojos. Las células LE son polimorfo nucleares que fagocitaron restos nucleares alterado, proveniente de la destrucción del núcleo de otros leucocitos, por el llamado
Factor LE
(Factor nuclear). Este es
Ig G-anti ADN
que se fija a la superficie del núcleo y determina alteraciones en la cromatina; y entonces al ser recubierto por anticuerpos, es fagocitado por los neutrofilos.El objetivo eshallar neutrofilos que tengan adherido En su superficie restos nucleares, o bien que los restos estén en su interior. Existen 2 métodos (entre otros)
 A) Método sin coágulo:
1- Sacar sangre al paciente, y colocar en frasquito con las perlas que posean 1 gota de heparina.2- Dejarlo rotar en el agitador por 30 minutos, o bien agitar vigorosamente por 5 a 10 minutos para generar la lisisdeleucocitos.3- Llevar la muestra a estufa de 37 ºC entre 1 a 4 horas, para darle tiempo a los leucocitos enteros a fagocitar los restos de los lisados y que decanten los glóbulos del plasma.4- Con la jeringa de aguja larga aspirar la capa de leucocitos, en la interface plasma-glóbulos rojos y descargar dentro de 2 a 4tubos de macrohematocrito.5- Centrifugar a muy baja velocidad (500-1000 rpm), por5minutos.6- Aspirar nuevamente con la jeringa la capa de leucocitos de los tubos, y descargar en los portas, y realizar los extendido conextensor.7- Colorear por el método de May Grunwald - Giemsa y ver con objetivo de inmersión. 

B) Método con coágulo:
1- Se sacan unos 5 a 10 ml de sangre y se la deja coagular durante2 horas a 37 ºC.2- Centrifugar a 3500 rpm por 10 minutos.3- Eliminar el suero ydepositar el coagulo sobre varias capas de gasa, y éstas sobre un embudo.4- Aplastar el coagulo con una varilla y recoger el producto en un tubo de ensayo.5- Pasar el liquido obtenido a un tubo de macro hematocrito con la jeringa con aguja larga, y centrifugar 15minutos a 2000 rpm.6- Usando la misma jeringa, eliminar primero el suero, y luegotomar la capa de leucocitos y depositar en portas parahacerextendidos.7- Colorear por el metodo de May Grunwald - Giemsa y ver con objetivo de inmersión.
Observación e interpretación:
Buscar los campos bien coloreados y con las células bien separadas, evitando lo observación de células "pegoteadas" por efecto de la lisis y la extensión. La prueba es positiva cuando se hallan leucocitos que fagocitaron restos nucleares de los lisados, o bien los tengaadheridos en su superficie, que se notara por la diferencia de color entre el resto nuclear y el núcleo de leucocito entero, y se informara "Se observan células LE "El " Fenómeno de Roseta" se debe a la adhesión de 2 o mas neutrofilos a un resto nuclear. Es raro de observar, y se debe diferenciar de las células "pegoteadas" propias de extendido. La presencia de leucocitos vacuolados no indicanecesariamente la presencia de células LE, ya que fagocitaron cualquier resto celular. La prueba no es totalmente especifica, debido a que enfermedades autoinmunes también generan células LE, y no tiene gran sensibilidad, ya que es negativa en 30% de pacientes con lupus. Esto se explica por el tratamiento con corticoides en estos enfermos, que inhibe la formación de este fenómeno, por lo actualmente notiene valor diagnostico y es necesario realizar otras pruebas, tal como a
 
Búsqueda de anticuerpos, que son más sensibles y especificas. Algunos laboratorios sugieren que se confirme la presencia de anticuerpos antinucleares (FAN/ANA) antes de buscar e informar las células LE, ya que es una técnica con alto error. Además no es específica para Lupus, y está cayendo en desuso. Sin embargo, para...