laboratorio pcr













INFORME DE LABORATORIO TRABAJO PRÁCTICO:

REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)



















I. Objetivos:

General: Determinar ycuantificar la carga viral para VIH de una muestra de plasma mediante la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

Específicos:
Realizar un PCR cuantitativo en tiempo real para unamuestra de cDNA
Calcular Tm teórica de los partidores F y R para determinar temperatura de alineamiento.
Determinar el tamaño teórico del amplicón.
Calcular Tm empírica del amplicón replicado paraverificar la presencia de genoma viral en la muestra.
Determinar el tamaño empírico del amplicón mediante una electroforesis.
Comparar el Tm empírico con el teórico del amplicón.
Determinar mediantela amplificación de la PCR el número de ciclos en el que comienza a detectarse fluorescencia
Estimar la carga viral de la muestra problema comparando con la curva estándar entregada previamente.Realizar un diagnóstico presuntivo del paciente utilizando los resultados del Tm y tamaño del Amplicón obtenidos.
Elaborar un control positivo y negativo para comparar y así poder confirmar losresultados obtenidos.






















II. Diagramas de flujo (incluir extracción de RNA y síntesis de cDNA)

a. PCR y análisis Tmb. Análisis electroforético












































III. Resultados


1. ResultadosTeóricos:

Tm partidores

Región codificante del gen de la proteasa del VIH:

5’acacaacaaatcagaagactgagttacaagcaatttatctagctttgcaggattcgggat-
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