laboratorio sangre

LABORATORIO DE EXTRACCION DE ADN
MATERIALES
Gravilla
Tubo de centrifugación
Puntas de Micropipeta
Pipeta paster
Reactivos: buffer de lisis TE 1X (EDTA, tris), NaCl, proteinasa K, alcohol 96%.La extracción de ADN es de suma importancia, debido a que la extracción de buena calidad me permitirá tener resultados certeros y verídicos en PCR y en Marcadores Moleculares.
Existen diferentestécnicas de extracción de ADN todas ellas difieren del tipo de célula, ya que en algunos casos se deben romper diferentes tipos de paredes, o de grasas, tales como en plantas donde hay pared celular, ymayor cantidad de grasas como en el algodón y en la palma.
Existen 3 pasos que son conservados en toda técnica de extracción de ADN:
1. LISIS CELULAR: Rompimiento de la célula.
2. ELIMINACION DECOMPONENTES CONTAMINANTES: (Lípidos, proteínas Carbohidratos)
3. PRECIPITACION DE ADN.
Para obtener el ADN más limpio depende de los reactivos que agregue en el paso 2 tales como: cloroformo, ofenol, este me permite solubilizar lípidos y precipitar proteínas.
En la extracción de ADN se combinan métodos físicos y químicos, entre ellos se encuentran.
METODOS FISICOS: Centrifugación. En lasangre por el proceso de centrifugación la hemoglobina en plasma queda en el sobrenadante, y los globulos blancos por obtener una mayor densidad, y es donde se encuentra el ADN queda en el peletteMETODOS QUIMICOS:
Alcohol: precipita el ADN
Detergente: lisis de membrana
NaCl: Romper célula, solubilizar el ADN
USO DE LOS REACTIVOS
Buffer de lisis TE 1X contiene tris que mantiene el pHestable, y el EDTA previene que las endonucleasas me degraden el ADN.
Proteínasa K: elimina las sustancias contaminantes, esta es una enzima la cual funciona de manera óptima a 60°C, esta rompe proteínasdejándolas en pequeños aminoácidos.
Disolucion en NaCl: Los aminoácidos que tienen cargas positivas y negativas, se unirán al cloro (+), y el sodio (-), haciéndolas mucho más densas las cuales...