Laboratorio

Glucosa
Método enzimático (GOD-PAD)
-Fundamento:
La enzima glucooxidasa cataliza la oxidación de glucosa a gluconato y peróxido de hidrógeno. La concentración de glucosa es proporcional al H2O2, este puede medirse apareándolo con un indicador de peroxidasa. La determinación de glucosa se efectúa mediante el método de Trinder según las siguientes reacciones:
GOD
Glucosa + O2 + H2O -------- H2O2+ Gluconato
POD
2H2O2 + Fenol + 4-AF------- Quinona + 4H2O .
Abreviaturas:
GOD = Glucosa oxidasa
POD = Peroxidasa
4-AF = 4-aminofenazona
-Reactivos:
REACTIVO 1 TRIS pH 7.4 92 mmol/L
Tampón Fenol 0.3 mmol/L
REACTIVO 2 Glucosa oxidasa 15000 U/L
Vial de enzimas Peroxidasa 1000 U/L
4-Aminofenazona 2.6 mmol/L
ESTÁNDAR Sol. Glucosa100 mg/L
CONTROL NORMAL Spinreact.
Preparación: Disolver los enzimas del R.2 en el contenido del R.1. Esta solución monorreactiva es estable 1 mes a 2-8ºC ó 7 días a 15 – 25ºC, al abrigo de la luz.
-Procedimiento:
1. Pipetear en tubos de ensayo:
Blanco Estándar Muestra Muestra Control
Estándar -- 10µL ----
Muestra -- -- 10µL --
M. Control -- -- -- 10µL
Reactivo 1.0mL 1.0mL 1.0mL 1.0mL
.001mL = 1 µL
2. Mezclar e incubar 10 min a 37ºC ó 30 min a temperatura ambiente.
3. Leer la absorbancia (A) a 505nm.
4. Coloración estable 30 minutos atemperatura ambiente
Formula:

Concentración del estándar: 100 mg/dL

-Valores de referencia:
Suero o plasma: 55-110 mg/dl

-Enfermedades:
Puede aparecer la glucemia aumentada (hiperglucemia) en:
Diabetes mellitus
Enfermedades renales
Feocromocitoma
Hipertiroidismo
Glucagonoma
Pancreatitis aguda
Síndrome de Cushing
Tumores de páncreas
Otras situaciones antes explicadas (estrés,sueros, embarazo, medicamentos)
Puede aparecer la glucemia disminuida (hipoglucemia) en:
Dietas excesivas
Enfermedades hepáticas
Enfermedad de Addison
Exceso de insulina en diabéticos
Hipopitituarismo
Hipotiroidismo
Insulinoma






Colesterol total
Método enzimático (GOD-PAD)
-Fundamento:
Los triglicéridos son hidrolizados enzimáticamente a glicerol, el cual, mediante Glicerol cinasa yGlicerol-P-oxidasa, libera el peróxido de hidrógeno que se valora mediante la reacción de Trinder, de acuerdo a las siguientes reacciones:
LPL
Triglicéridos + H2O-------Glicerol + Ácidos grasos.
GK
Glycerol + ATP --------Glicerol-3-P + ADP.
GPO
Glicerol-3-P + O2---------- Dihidroxiacetona-P +H2O2.
POD
H2O2 + 4-AF + p-clorofenol------- Quinona + H2O.
La cantidad de la quinona formada es proporcional a la concentración de triglicéridos.
Abreviaturas:
LPL = Lipoproteinlipasa
GK = Glicerol Cinasa
GOP = GlicerolP-oxidasa
POD = Peroxidasa.
-Reactivos:
REACTIVO 1 Tampón GOOD pH 7.5 50mmol/L
Tampón p-clorofenol 2mmol/L
REACTIVO 2 Lipoproteinlipasa150000 U/L
Vial enzimas Glicerol Kinasa 500 U/L
Glicerol-P-oxidasa 2500 U/L
Peroxidasa 440 U/L
4-Aminofenazona 0.1 mmol/L
ATP 0.1 mmol/L
ESTÁNDAR Sol. Triglicéridos 200 mg/dL
CONTROL NORMAL Spinreact.
Preparación: Disolver el contenido del vial enzimas R.2 en el frasco de solución tampónR.1
-Procedimiento:
1. Pipetear en tubos de ensayo:
Blanco Estándar Muestra Muestra Control
Estándar -- 10µL -- --
Muestra -- -- 10µL --
M. Control -- -- -- 10µL
Reactivo...