Laboratorio1



Tinción de Gram
1. Introducción
En el estudio de la microbiología es fundamental la observación de los microorganismos para ello es necesario la utilización del microscopio óptico y electrónico para este laboratorio utilizaremos un microscopio óptico.
Un microscopio suele tener cuatro objetivos, pero en microbiología se usa preferentemente el objetivo de inmersión, aunque para visualizar unapreparación siempre se recomienda empezar por el objetivo de x10 y una vez localizada la muestra ir subiendo poco a poco el nivel de aumentos.
En el microscopio hay dos formas de ver las preparaciones
Preparaciones en fresco con el objetivo seco. Tiene el inconveniente de que las preparaciones son muy difíciles de ver debido al poco contraste del medio que les rodea.
Preparaciones fijadas yteñidas con el objetivo de inmersión. Se matan las bacterias, pero son más visibles y su contraste es superior y de mayor calidad.
Entre los tipos de preparaciones del segundo tipo, hay un método de tinción que se usa universalmente para distinguir a las bacterias en dos grandes grupos: se trata de la Tinción de Gram. Es una tinción diferencial que basa su distinción en la estructura diferente de lapared bacteriana de las bacteria Gram + (pared más gruesa, y una sola capa de peptidoglucano) y de las Gram- (pared más delgada y dividida en dos partes). Las sustancias usadas son:
Colorante básico Cristal Violeta
Lugol
Alcohol acetona.


2. Marco Teórico
Tinción Gram
La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio bacteriológico y con el que el estudiantedebe estar perfectamente familiarizado. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana (Cocos, Bacilos, Positivos, Negativos, Etc.) se basan justamente en la tinción de GRAM
Esta tinción se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844. Sobre labase de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram-positivas y Gram-negativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias)
 Clásicamente los reactivos utilizados para la realización de la tinción de Gram han sido el cristal violeta comocolorante inicial, la solución de lugol para acomplejar a éste, el alcohol y/o acetona para la decoloración y la safranina o fucsina básica como contra colorante.
En cuanto a la reacción Gram y características morfológicas de los microorganismos visualizados, estas son:
Gram:
Positivo:   de violeta fuerte a azul claro.
Negativo: rosa o rojo (en el caso de carbol-fucsina el rojo será intenso).Variable:   microorganismos parcialmente positivos y negativos. Puede ser debido a una mala extensión, fijación o tinción, presencia de células viejas, daño en la pared celular o por particularidades especiales de la pared celular de ciertos microorganismos.
Neutro:   no toman ningún color, siendo generalmente el fondo alrededor de ellos de un ligero gram (-). Los microorganismos pueden serintracelulares. Esta reacción gram ha sido vista en tinciones de muestras clínicas en donde están presentes elementos fúngicos o algunas especies de micro bacterias.
Otras características:   a examinar en el gram son si la tinción de los microorganismos es homogénea, bipolar, en cuentas o gotas, punteada, en barras o irregular.Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tinción de Gram:
1) Eltratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por sí solo tiene poca afinidad con las células.
2) La decoloración debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tinción las células gram-positivas. EI proceso de decoloración debe ser corto y es esencial un cálculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios.
3) Cultivos más viejo de 24 horas pueden...