laboratorioespectro

Resumen: La enzima tirosinasa cataliza la reacción del aminoácido tirosina que en presencia de oxígeno sufre ciertas transformaciones secuenciales hasta llegar a dopacromo, que es el precursor de la coloración café oscura en ciertas frutas y vegetales; esta condición se conoce como pardeamiento enzimático.
La concentración de dopacromo se puede determinar con la ayuda del fotocolorímetro,obteniendo su máxima longitud de onda que es 420nm. La grafica de la longitud de onda del dopacromo vs. Tiempo se utiliza para determinar la concentración de L-Dopa en la muestra o la velocidad de reacción del dopacromo.

Palabras clave: Tirosina, L-Dopa, dopacromo, pardeamiento enzimático.
Objetivos:
Obtención de extractos enzimáticos de diferentes fuentes: banano, manzana y papa.
Determinaciónde la actividad de la tirosinasa y velocidades de reacción de los diferentes extractos enzimáticos usando como sustrato L-Dopa.
Evaluar, analizar y determinar la actividad de la enzima tirosinasa en diferentes condiciones: condiciones normales, presencia NaCN (inhibidor) y con aumento de su temperatura.
Metodología: La práctica realizada para la obtención de la enzima tirosinasa y ladeterminación de su actividad. Consistió en primer lugar en la obtención de un extracto enzimático (papa); se picó finamente la papa, se pesaró 20 gramos de dicho extracto y se trituró en un mortero (enfriado con anterioridad) en presencia de 15ml de una solución buffer de fosfato a pH=7.2 con el fin de conservar mejor el extracto, después se adicionaron 15ml mas de la solución buffer a pH=7.2 hasta completarun volumen de 30ml. El extracto resultante con ayuda de una gasa se filtró en un beaker y se trasladó a dos tubos de 15ml que se centrifugaron a 200 rpm durante 10 minutos.
El sobrenadante de la solución obtenida se decantó en dos tubos de ensayo sin hacer caer el precipitado y se diluyó a seis volúmenes con solución buffer a pH=7.2. la solución diluida se almacenó en la nevera para que seconserve.
Después se calibró el fotocolorímetro en absorbancia igual a cero (λ=420nm) con el siguiente blanco: 1m.l de extracto enzimático, 3 ml. de solución buffer de pH=6.0 y 1ml. de agua destilada.
En un tubo de ensayo 1 se preparó la siguiente solución: 1 ml. del extracto enzimático, 3 ml. de solución buffer a pH = 6.0 y 1 ml. de solución de Dopa 0.03M. Inmediatamente después de agregar lasolución de Dopa se determinó la absorbancia en el fotocolorímetro y se empezó a contar el tiempo a partir de cero de minuto en minuto hasta completar 15. Los datos fueron registrados en la tabla.
En un tubo de ensayo 2, se preparó la siguiente solución: 1 ml. de extracto enzimático y 3 ml. de solución buffer a pH = 6.0 el tubo se introdujo en un baño de agua hirviendo durante 10 minutos y después sedejó enfriar a temperatura ambiente y se agregó 1ml. de dopa 0.03M, se llevó al fotocolorímetro y se usó el mismo método (15 lecturas) y blanco anteriores.
Se preparó un tubo de ensayo No 3 agregando: 1 ml. de extracto enzimático, 3 ml. de solución buffer a pH = 6.0 y 50-100 mg de ácido ascórbico. Se adicionó 1ml de solución de dopa 0,03M, y se midió la absorbancia usando el método anterior.Introducción: En la madurez y envejecimiento de las especies vegetales, uno de los procesos naturales más importantes es el pardeamiento enzimatico causado por la enzima polifeniloxidasa (PPO).
El pardeamiento enzimático es una reacción de oxidación en la que interviene como substrato el oxígeno molecular, catalizada por un tipo de enzimas que se puede encontrar en prácticamente todos los seresvivos, desde las bacterias al hombre. En el hombre es la responsable de la formación de pigmentos del pelo y de la piel. En los cefalópodos produce el pigmento de la tinta, y en los artrópodos participa en el endurecimiento de las cutículas del caparazón, al formar quinonas que reaccionan con las proteínas, insolubilizándolas.
La enzima responsable del pardeamiento enzimático recibe el nombre...