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lab. nº5. : CARACTERIZACION BIOQUIMICA DE ENTEROBACTERIAS

laboratorio de microbiologia

Presentado a:

RESULTADOS

ACS: verde
SIM + 3 gotas de reactivo: no hay anillo amarillo

Agar McKey: rosado +

Agar SS:rosado-rojo +

Urea: cambio a rosado fondo amarillo +

TSI: desplazamiento por fermentación y precipitado de sulfuro de hierro

Lisina : morado

MR: rosado +

VP:amarillo -

DISCUSION

MR-VP Medio

Medio utilizado para la realización del ensayo de Rojo de Metilo y Voges Proskauer.
Es particularmente útil para la clasificación de enterobacterias.

Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada porlos microorganismos, a través de distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol).
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser reconocida por la adición de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de productos ácidos, y por laadición de alfa naftol e hidróxido de potasio para evidenciar la presencia de productos finales neutros.
Voges y Proskauer, describieron una coloración rojiza que aparecía después de adicionar hidróxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta coloración se debe a la oxidación del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del mediopara dar un color rojo.
Siembra
Por inoculación directa, a partir del cultivo en estudio.
Incubación
En aerobiosis, a 35-37°C por 3 días.
Revelado de pruebas bioquímicas

a-Prueba del rojo de metilo:

b-Prueba del Voges Proskauer:

Resultados

1-Prueba del rojo de metilo:
Positivo: color rojo.
Negativo: color amarillo.

2-Prueba de Voges Proskauer:
Positivo: desarrollo deun color rojo en pocos minutos después de una completa agitación del tubo.
Negativo: ausencia de color rojo.
Microorganismo | Crecimiento | RM | VP |
E. coli ATCC 25922 | Bueno | + | - |
K. pneumoniae ATCC 700603 | Bueno | - | + |
P. mirabilis ATCC 43071 | Bueno | + | - |
S. typhimurium ATCC 14028 | Bueno | + | - |
Citrobacter freundii | Bueno | + | - |
Enterobacter aerogenes |Bueno | - | + |
Simmons Citrato Agar

Medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias, en base a la capacidad de usar citrato como única fuente de carbono y energía.

Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las salesde fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con laconsiguiente producción de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos ybicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa.
Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inóculo ligero , usando una ansa sin arrastrar el agar.

Incubación
A 35-37 ºC, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 días de incubación.

Resultados  ...