Lactato Dehidrogensa
Páginas: 5 (1211 palabras)
Publicado: 14 de julio de 2011
Introducción
El lactato deshidrogenasa es una enzima catalizadora que se encuentra en muchos tejidos del cuerpo, pero su presencia es mayor en el corazón, hígado, riñones, músculos, glóbulos rojos, cerebro y pulmones.
Corresponde a la categoría de las oxidorreductasas, dado que cataliza una reacción redox, en la que el piruvato es reducido a lactato gracias a la oxidación de NADH a NAD+. Dadoque la enzima también puede catalizar la oxidación del hidroxibutirato, ocasionalmente es conocida como Hidroxibutirato Deshidrogenasa (HBD).
Participa en el metabolismo energético anaerobio, reduciendo el piruvato (procedente de la glucólisis) para regenerar el NAD+, que en presencia de glucosa es el sustrato limitante de la vía glucolítica.
Los vertebrados, en algunos tejidos o tiposcelulares, obtienen la mayor parte de su energía del metabolismo anaerobio (toda en el caso de eritrocitos dado que carecen de mitocondrias).
La reacción es reversible. Es una reacción bisustrato del tipo bi-bi secuencial ordenado. En primer lugar entra el NADH seguido por el piruvato y tras el paso catalítico se libera secuencialmente lactato y NAD+. En condiciones estándar la variación de energíalibre de la reacción (∆G0’) es de -25,1 kJ/mol, estando muy desplazada hacia la formación de lactato. Sin embargo ésta reacción puede producirse en dirección contraria en función de la relación de concentraciones de sustratos y productos. Esto se manifiesta con claridad en el Ciclo de Cori: mientras que en el músculo esquelético, especialmente durante el ejercicio físico intenso, la reacción seproduce en la dirección descrita, en el hígado y el músculo cardiaco (metabolismo oxidativo), el lactato procedente del músculo esquelético se reoxida a piruvato para su utilización por la gluconeogénesis y por el ciclo de Krebs.
Procedimiento
* Preparación de las muestras:
SangreSangre + Agua
Sangre Sangre Centrifugada
* Determinación de LDH:
Tubo A
Piruvato + Plasma + Sangre Hemolizada
Tubo B
Piruvato +Plasma + NADH
Resultados
| ASin Hemólisis | BCon Hemólisis |
Abs 1 | 0.188 | 0.038 |
Abs 2 | 0.172 | 0.033 |
Abs/min | 0.016 | 5x10-3 |
Actividad LDH | 161.28 | 50.4 |
Cálculos:
A= Sin Hemólisis B= Con Hemólisis
= 0.188 – 0.172 = 0.038 – 0.0331 min 1 min
= 0.016 = 5x10-3
Actividad LDH= Abs/min x 10080 Actividad LDH= Abs/min x 10080
= 0.016/10080 = 5x10-3/10080= 161.28 = 50.4
En los resultados obtenidos en nuestra experiencia podemos decir que:
* Sangre sin hemolisis
Observación:
La LDH presente en plasma se encuentra dentro en los rangos normales (161,28 IU/L) en adulto que es de 100 a 200 UI/L.
* Sangre con hemolisis
Nota: los resultadosobtenidos en nuestra experiencia fue de 50UI/L (demasiado bajo del límite del rango que es de 100IU/L) esto se debió a que no se le agrego el NADH en el momento indicado y cuando se trató de hacerlo la enzima ya se había desnaturalizado por diversos factores como la temperatura, el tiempo y que el momento para medir la absorbancia fue demasiado tarde entre otros factores y por eso el resultado...
El lactato deshidrogenasa es una enzima catalizadora que se encuentra en muchos tejidos del cuerpo, pero su presencia es mayor en el corazón, hígado, riñones, músculos, glóbulos rojos, cerebro y pulmones.
Corresponde a la categoría de las oxidorreductasas, dado que cataliza una reacción redox, en la que el piruvato es reducido a lactato gracias a la oxidación de NADH a NAD+. Dadoque la enzima también puede catalizar la oxidación del hidroxibutirato, ocasionalmente es conocida como Hidroxibutirato Deshidrogenasa (HBD).
Participa en el metabolismo energético anaerobio, reduciendo el piruvato (procedente de la glucólisis) para regenerar el NAD+, que en presencia de glucosa es el sustrato limitante de la vía glucolítica.
Los vertebrados, en algunos tejidos o tiposcelulares, obtienen la mayor parte de su energía del metabolismo anaerobio (toda en el caso de eritrocitos dado que carecen de mitocondrias).
La reacción es reversible. Es una reacción bisustrato del tipo bi-bi secuencial ordenado. En primer lugar entra el NADH seguido por el piruvato y tras el paso catalítico se libera secuencialmente lactato y NAD+. En condiciones estándar la variación de energíalibre de la reacción (∆G0’) es de -25,1 kJ/mol, estando muy desplazada hacia la formación de lactato. Sin embargo ésta reacción puede producirse en dirección contraria en función de la relación de concentraciones de sustratos y productos. Esto se manifiesta con claridad en el Ciclo de Cori: mientras que en el músculo esquelético, especialmente durante el ejercicio físico intenso, la reacción seproduce en la dirección descrita, en el hígado y el músculo cardiaco (metabolismo oxidativo), el lactato procedente del músculo esquelético se reoxida a piruvato para su utilización por la gluconeogénesis y por el ciclo de Krebs.
Procedimiento
* Preparación de las muestras:
SangreSangre + Agua
Sangre Sangre Centrifugada
* Determinación de LDH:
Tubo A
Piruvato + Plasma + Sangre Hemolizada
Tubo B
Piruvato +Plasma + NADH
Resultados
| ASin Hemólisis | BCon Hemólisis |
Abs 1 | 0.188 | 0.038 |
Abs 2 | 0.172 | 0.033 |
Abs/min | 0.016 | 5x10-3 |
Actividad LDH | 161.28 | 50.4 |
Cálculos:
A= Sin Hemólisis B= Con Hemólisis
= 0.188 – 0.172 = 0.038 – 0.0331 min 1 min
= 0.016 = 5x10-3
Actividad LDH= Abs/min x 10080 Actividad LDH= Abs/min x 10080
= 0.016/10080 = 5x10-3/10080= 161.28 = 50.4
En los resultados obtenidos en nuestra experiencia podemos decir que:
* Sangre sin hemolisis
Observación:
La LDH presente en plasma se encuentra dentro en los rangos normales (161,28 IU/L) en adulto que es de 100 a 200 UI/L.
* Sangre con hemolisis
Nota: los resultadosobtenidos en nuestra experiencia fue de 50UI/L (demasiado bajo del límite del rango que es de 100IU/L) esto se debió a que no se le agrego el NADH en el momento indicado y cuando se trató de hacerlo la enzima ya se había desnaturalizado por diversos factores como la temperatura, el tiempo y que el momento para medir la absorbancia fue demasiado tarde entre otros factores y por eso el resultado...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.