Lactato deshidrogenasa

PARTICIPACION DE LAS COENZIMAS EN LAS REACCIONES ENZIMATICAS
ACTATO DESHIDROGENASA
OBJETIVO
Conocer la importancia de la participación de las coenzimas (NAD; NADH) en lareacción de la determinación de la enzima LDH
Observar el comportamiento que tienen las coenzimas NAD; NADH en la reacción de LDH.
Relacionar la actividad de lascoenzimas con la obtención de concentración en U/L; en este caso de la enzima LDH en suero.
Se mide con mayor frecuencia para verificar daño tisular.
FUNDAMENTO
PointeScientific, Inc.
La LDH específicamente cataliza la oxidación de lactato a piruvato con la subsecuente reducción de NAD a NADH. La velocidad a la cual se forma la NADH esproporcional a la actividad de la LDH. El método se basa en la conversión de lactado a piruvato, es una reacción lenta por su amplio rango de linealidad y sin necesidad de preincubación. El método presenta la siguiente reacción y ha sido optimizada para una mayor sensibilidad y linealidad.
L-lactato + NAD+ □(→┴( LDH ) ) piruvato + NADH + H+
LDHcataliza la oxidación de lactato a piruvato con reducción de NAD a NADH. El rango de NAD reducido puede ser medida como un incremento en la absorbancia a 340 nm. La absorbancia esdirectamente proporcional a la actividad de LDH en suero.
REACTIVO
NAD 7.0mM, L-lactato 50 mM, Tris Buffer, pH 9.0 ± 0.
PREPARACION DEL REACTIVO
Se reconstituye con elvolumen de agua destilada que está establecido en el vial.
Una vez agregado al agua invertir por 15 min lentamente para disolver.
RESULTADO Valor de referencia: 100-225U/L
LDH: 694 U/L
CONLCLUSION
El valor de LDH obtenido debió haber dado mas elevado pero debido al tiempo de obtención de muestra, disminuyo, por ser una reacción enzimática.