LAL reactivo

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VALIDACIÓN DE LA TÉCNICA L.A.L. (GEL CLOTH) EN
LOS AGENTES DE RADIODIAGNÓSTICO Y
RADIOISÓTOPOS
M. Moróte, M. Otero, G. Chavez

INSTITUTO PERUANO DE ENERGÍA NUCLEAR
CENTRO NUCLEAR "RACSO"

XVI CONGRESO DE LA ASOCIACIÓN LATINOAMERICANA DE
SOCIEDADES DE BIOLOGÍA Y MEDICINA NUCLEAR

ALASB1MN

24-28 Octubre 1999
Buenos Aires - Argentina

VALIDACIÓN DE LA TÉCNICA L.A.L. (GELCLOTH) EN
LOS AGENTES DE RADIODIAGNÓSTICO Y
RADIOISÓTOPOS
M. Moróte (1), M. Otero (1), G. Chavez (2)
(1) Instituto Peruano de Energía Nuclear (IPEN)
(2) Empresa Científica Andina S.A.

RESUMEN
Sobre la base de la validación de la técnica L.A.L. (gel cloth), se han logrado
determinar los límites reales de endotoxina (L.E.), que se expresa en unidades
de endotoxina por mililitro (UE/mL) y el máximovolumen de dilución (M.V.D.) en
siete agentes de radiodiagnóstico (A.R.D.): Medronato, Pentetato, Sulfuro
Coloidal, Macroagregado de Albúmina, Succímero, Disofenin y Pirofosfato; los
cuales reportaron valores de M.V.D. correspondiente a: 1:80; 1:16; 1:128; 1:64;
1:4; 1:128; 1:64 y un L.E. de 20 U.E./mL; 4 U.E./mL; 32 U.E./mL; 16 U.E./mL; 1
U.E./mL; 32 U.E./mL y 16 U.E./mL respectivamente. Para el casodel
radioisótopo Tecnecio 99m presenta un M.V.D. de 1:1 y un L.E. menor de 0,25
U.E. / mL. Se determinó también una evidente interferencia de la acidez (pH
menor de 2) del Sulfuro Coloidal frente a la reacción del Pyrotell, hasta en la
sexta dilución del producto. Asimismo, los resultados del M.V.D. determinaron
que las diluciones son bastante menores hasta en 100 veces con relación a los
valoresteóricos.

MATERIALES Y MÉTODOS
1. Materiales
Se emplean los siguientes materiales:
Tubos de ensayo de vidrio 20 x 150 mm (despirogenados)
Tubos de vidrio "pirotubos" para reacción L.A.L, 10 x 75 mm (despirogenados)
Tips de 200 uL de capacidad (despirogenados)
Combitips de 5mL de capacidad (despirogenados)
Pipetas de vidrio de 10; 5; 2 y 1 mL (despirogenados)
Propipeta
Micropipetas de 20 y 200 uLde capacidad máxima
Micropipeta repetitiva para combitips
Gradillas metálicas para 6 tubos de ensayo y 30 pirotubos de reacción LAL
Rollo de parafilm
Pinza mediana plana
Desprecintador de viales
Rollo de papel platina
Algodón

Se emplean los siguientes reactivos:
Viales de Control Estándar de Endotoxina (CSE) de 0,5 ug por vial
Viales de Pyrotell (Limulus Amebocyte Lysate)
Viales de Agua LAL(LRW)
Viales de Buffer
Se emplean los siguientes equipos:
Baño María
Agitador de tubos

2. Metodología
La metodología se basa en los reportes de la empresa Cape Cod Inc. de USA ,
que provee los reactivos LAL y que han sido estandarizados para nuestros
productos. Comprende las siguientes etapas:
2.1 Caracterización del producto
Para el caso de los radiofármacos, los Límites de Endotoxina (LE) son másexigentes que los fármacos en general, siendo 175 UE / V, en donde "UE" son
las unidades de endotoxinas y "V es la máxima dosis que se le administra al
paciente, expresado en mL. Si la máxima dosis de un producto determinado es
de 1mL, entonces el L..E. es de 175 UE / mL.
Como la sensibilidad del Pyrotell es menor de 1 UE / mL, no es correcto agregar
dicho reactivo directamente al producto, debidoa que daría un falso posjtivo
(coagula) por que el L. E. tolerable para el ser humano se presenta en la
mayoría de los casos como mayor que la unidad. Por tal motivo se realiza al
producto una Máxima Dilución Válida (MVD), en la que puede detectarse la
concentración límite de endotoxinas.

Ejemplo:

MVD

= Límite de .Endotoxinas. en UE/ mL
Sensibilidad del Pyrotell ( X )

MVD

= .100 UE / mL0,25UE/mL(A

MVD

= 400

2.2 Validación de Agentes de Radiodiagnóstico (ARD) por la técnica LAL
Una vez que tengamos el LE y el MVD teóricos de un ARD, se procede a
determinar los valores prácticos mediante la validación.
La prueba de validación se lleva a cabo por medio de diluciones del Contol
Estándar de Endotoxina (CSE) y un control negativo por duplicado, además
una serie de diluciones del...