larimsh




UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE QUÍMICA

Efecto genotóxico in vitro de Larimsh™
Tesis
QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE
QUÍMICA FARMACÉUTICA BIÓLOGA

PRESENTA
SANDRA GABRIELA HERNÁNDEZ GUZMÁN



MÉXICO, D.F. 2014





JURADO ASIGNADO:

PRESIDENTE: Profesor: Perla Carolina Castañeda López
VOCAL: Profesor: Martha Patricia CoelloCoutiño
SECRETARIO: Profesor: Lourdes Monserrat Sordo Cedeño
1er. SUPLENTE: Profesor: Tzvetanka Dimitrova Dinkova
2° SUPLENTE: Profesor: Sara Rosario Cruz Morales


SITIO DONDE SE DESARROLLÓ EL TEMA:
Universidad nacional autónoma de méxico, instituto de investigaciones biomédicas, laboratorio de medicina genómica y toxicología ambiental.


asesor del tema:
Lourdes Monserrat SordoCedeño ______________________________
SUSTENTANTE:
Sandra Gabriela Hernández Guzmán ______________________________


Índice
1.- Resumen……………………………………………………………………………
1
2.- Introducción…………………………………………………………………………
3

2.1.- Cáncer y carcinogénesis………………………………………………….
3

2.2.- Tratamiento contra el cáncer…………………………………………….
4

2.3.- Larimsh……………………………………………………………………..
5

2.4.-Genotoxicidad……………………………………………………………...
6

2.5.- Marcadores biológicos……………………………………………………
7

2.6.- Ensayo de micronúcleos………………………………………………….
8


2.6.1.- Ensayo de micronúcleos con bloqueo de la citocinesis……...
8


2.6.2.- Criterios para evaluar células en el ensayo de micronúcleos con bloqueo de la citocinesis……………………………………………
11


2.6.3.- Criterios para contabilizarmicronúcleos……………………….
11

2.7.- Citotoxicidad……………………………………………………………….
11

2.8.- Línea celular HepG2………………………………………………………
12
3.- Justificación…………………………………………………………………………
13
4.-Hipótesis……………………………………………………………………………..
14
5.- Objetivo general……………………………………………………………………
14

5.1.- Objetivos particulares……………………………………………………..
14
6.- Materiales y métodos……………………………………………………………...
15

6.1.-Donadores………………………………………………………………….
15

6.2.- Extracción de linfocitos de sangre periférica…………………………...
15

6.3.- Cultivo de linfocitos………………………………………………………..
16

6.4.- Tratamiento………………………………………………………………...
16

6.5.- Citotoxicidad……………………………………………………………….
16

6.6.- Ensayo de micronúcleos con bloqueo de la citocinesis (CBMN)…….
17

6.7.- Línea celular HepG2………………………………………………………
17

6.8.-Análisis estadístico………………………………………………………..
20
7.- Resultados………………………………………………………………………….
21

7.1.- Efectos citostáticos, citotóxicos y genotóxicos de Larimsh™ en linfocitos humanos………………………………………………………………
21

7.2.- Efectos citostáticos y genotóxicos de Larimsh™ de los posibles metabolitos de Larimsh™ utilizando la línea celular HepG2 como modelo de activaciónmetabólica………………………………………………………..
26
8.- Discusión……………………………………………………………………………
28
9.- Conclusiones……………………………………………………………………...
31
10.- Referencias………………………………………………………………………..
32















Índice de figuras
FIGURA 1A.
Origen de los micronúcleos por la pérdida de cromosomas completos y fragmentos de cromosomas acéntricos durante la anafase
9
FIGURA 1B.
Formación de un puente nucleoplásmico derivado de un cromosoma dicéntrico.
9FIGURA 2.
Determinación del citoma. Efectos cromosómicos en células expuestas a xenobióticos, detectados mediante el ensayo de micronúcleos con bloqueo la citocinesis.
10
FIGURA 3.
Diagrama de flujo del ensayo de micronúcleos con bloqueo de la citocinesis, índice nuclear y del ensayo de viabilidad en linfocitos humanos.
18
FIGURA 4.
Diagrama de flujo del ensayo de micronúcleos con bloqueo dela citocinesis e índice nuclear en la línea celular HepG2.
19
FIGURA 5A.
Efecto citotóxico de LR a las concentraciones de 0.5, 1.5 y 3.0 mM.
23
FIGURA 5B.
Efecto citostático LR a las concentraciones de 0.5, 1.5 y 3.0 mM.
23
FIGURA 6A.
Evaluación de la citotoxicidad de LR a las concentraciones de 50, 300 y 500 µM.
24
FIGURA 6B....