Las cosas

Resumen
El ph extremo y le entorno rico en proteasa del tracto gastro instestinal superior es un gran obstáculo que enfrentan proteínas terapéuticas oralmente administradas, incluyendo a los anticuerpos. A través de la ingeniería de proteínas varias toxinas especificas clostridium defficile de cadena pesada dominio variable (VHH) se expresaron con un puente di sulfuro adicional mediante laintroducción de Ala/Gly54Cys y mutaciones Ile78Cys. Anticuerpos mutantes se compararon con sus homólogos de tipo salvaje con respecto al rendimiento de expresión el estado de expresión, el estado de no acumulación, la afinidad para la toxina A, dicroísmo circular (CD)las firmas estructurales, estabilidad térmica , resistencia a la proteasa y la capacidad de la toxina A-neutralizante. El mutanteVHHs se encontró que estaba bien expresado, aunque con rendimientos mas bajos en comparación con sus homólogos de tipo salvaje, fueron no acumulando monómeros, mantienen baja afinidad enM para la toxina A, aunque la mayoría mostro menor afinidad en comparación con sus homologos de tipo salvaje, y eran capaces de la neutralización de toxina A in vitro en ensayos basados en células. CD espectrospiauv lejana y cencana Uv mostro consistentemente los cambios de peak en la intensidad y peak selectiva minimos para parejas de tipo salvaje y mutantes VHH; sin embargo el perfil general de DC sigue siendo muy similar, se observo un aumento significativo en el desarrollo de temperatura del punto térmico medio para todos los mutantes, tanto a ph neutro y acido. La digestión de los VHH con lasprincipales proteasas GI, en concentraciones biológicamente pertinentes, revelo un aumento significativo de la resistencia a la pepsina para todos los mutantes y un aumento en la resistencia a la quimio tripsina para la mayoría de los mutantes .la resistencia a la tripsina de VHH mutante fue similar a VHH salvaje aunque la resistencia a la tripsina de un VHH mutante fue significativamente reducida.Por lo tanto la introducción de u n segundo enlace disulfuro en el nucleo hidrofobico no solo aumenta la estabilidad térmica de VHH a pH neutro, como se muestra anteriormente, sino que también representa una estrategia genérica para aumentar la estabilidad de VHH a Ph bajo e impartir resistencia a la proteasa, con tan solo perturbaciones menores apuntando afinidades de unión. Estas son todas lascaracterísticas deseables para el diseño de agentes terapéuticos orales a base de proteínas.

Introducción
El tracto gastrointestinal (gI) es el sitio de numerosas infecciones microbianas causadas por una amplia gama de patógenos, incluyendo: Helicobacterpylori, salmolla Thypi ,Vibrio cholerae, escherichia coli, Campylobacter jejuni,C difficile. El actual enfoque para el tratamiento de lamayoría de estas infecciones implica la administración de antibióticos, que sitúan la presión selectiva sobre el organismo, puede llevar a la resistencia antibiótica y suprime o elimina al microbio comensal (de comensalismo oe siu) beneficioso. Patógenos causantes de enfermedades del tracto GI se basan en una gran cantidad de factores de virulencia para al colonización, adhesión, la motilidad, entradacelular y patogénesis. Estos incluyen pero se limitan a: proteínas de la capa superficial, adhesinas, invasinas, flagelos, toxinas de alto peso molecular y moléculas de detención de quórum. La inhibición de los factores de virulencia bacteriana que son esenciales para la enfermerdad patogénesis por lo tanto representa una novela, basada en una estrategia no antibiótico para el tratamiento deenfermedades infecciosas , al mismo tiempo reduce el riesgo de la resistencia microbiana y el mantenimiento de poblaciones intestinales comensales.
Varios métodos (enfoques) se están explorando para la terapia antivirulencia microbiana. La inhibición de la unión al pilus de eColi {4}, Factor letal Bacillus antharacis {5,6}, sistemas de secreción tipo III {7,8}, vías sensoriales staphylococcus...