Las enseñanazas de don juan
• Concentración de sustrato o sustratos (cofactores) • Concentración de enzima • Inhibidores • Activadores • pH • Temperatura
Rosario A. Muñoz-Clares
Regulación de la actividad enzimática por unión a la enzima de ligandos que no son sustrato
• INHIBIDOR : Molécula o ion que al unirse a la enzima produce unadisminución en la velocidad de la reacción catalizada. • ACTIVADOR: Molécula o ion que al unirse a la enzima produce un aumento en la velocidad de la reacción catalizada.
Rosario A. Muñoz-Clares
SATURACIÓN POR INHIBIDORES Y ACTIVADORES REVERSIBLES
30
25
Velocidad (µmol/ml/min)
Velocidad (µmol/ml/min)
20
[S] = cte [E] = cte
25
20
15
15
[S] = cte [E] = cte
10
105
5
0 0 5 10 15 20
0 0 5 10 15 20
[Inhibidor] (mM)
[Activador] (mM)
Rosario A. Muñoz-Clares
Caracterización de la inhibición enzimática
• Determinar el tipo de inhibición • Determinar la constante de inhibición
Rosario A. Muñoz-Clares
TIPOS DE INHIBIDORES
• ISOSTÉRICO
El inhibidor se une al mismo sitio que el sustrato (sitio activo).
• ALOSTÉRICO
El inhibidorse une a un sitio diferente al que se une el sustrato (sitio alostérico).
Rosario A. Muñoz-Clares
TIPOS DE INHIBIDORES
– TOTAL
Si todas las moléculas de enzima tienen unido al inhibidor la velocidad de la reacción catalizada es cero.
– PARCIAL
Aun cuando todas las moléculas de enzima tengan unido al inhibidor la velocidad de la reacción catalizada no es cero.
Rosario A.Muñoz-Clares
Inhibición total
Ks
E + S
+I
ES
kcat Kiu
E + P
ESI
E + I + P
Rosario A. Muñoz-Clares
Inhibición parcial
Ks
E + S
+I
ES
kcat Kiu
E + P
ESI
β> [E]t El equilibrio E + I EI se alcanza rápidamente y es fácilmente reversible.
• Firmemente unidos
– [I]t ≈ [E]t El equilibrio E + I EI se alcanza rápidamente, pero la union es tan fuerte que sepueden considerar como irreversibles.
Rosario A. Muñoz-Clares
TIPOS DE INHIBIDORES REVERSIBLES
PRODUCTOS
• Inhiben porque: (1) al unirse a la especie de la enzima por la que tienen afinidad, disminuyen la proporción de la enzima disponible para unir el sustrato, y (2) porque revierten la reacción (en el caso de reacciones reversibles).
SIN SALIDA
•
Inhiben porque secuestran formas dela enzima, que ya no están disponibles para que se una el sustrato. Forman complejos con la enzima que no pueden participar en la reacción. Estos inhibidores sólo pueden unirse y despegarse de la especie de la enzima por la que tengan afinidad.
– Pueden ser productos, sustratos o análogos de sustratos o productos.
Rosario A. Muñoz-Clares
TIPOS DE INHIBIDORES REVERSIBLES
• PRODUCTO E + SE-S E-P E + P
• SIN SALIDA E + I E-I
Rosario A. Muñoz-Clares
TIPOS DE INHIBIDORES
– LINEAL (Total)
Si los regráficos de los intersectos o pendientes de las gráficas de dobles recíprocos dependen linearmente de la concentración de inhibidor
– HIPERBÓLICO (Parcial)
Si los regráficos de los intersectos o pendientes de las gráficas de dobles recíprocos dependen hiperbólicamente de laconcentración de inhibidor
– PARABÓLICO (Total)
Si los regráficos de los intersectos o pendientes de las gráficas de dobles recíprocos dependen parabólicamente de la concentración de inhibidor
Rosario A. Muñoz-Clares
INHIBIDORES LINEALES
– Aparecen términos en el denominador de la ecuación de velocidad proporcionales a la concentración de inhibidor – Los regráficos de los parámetroscinéticos aparentes vs la concentración de inhibidor son lineales – Producen una inhibición total
Rosario A. Muñoz-Clares
TIPOS DE INHIBIDORES REVERSIBLES
• COMPETITIVO
– El inhibidor se une a la enzima libre interfiriendo con la unión del sustrato
•
INCOMPETITIVO
– El inhibidor se une al complejo enzima-sustrato interfiriendo con la formación de producto
•
MIXTO
– El...
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