Lic. en Biología

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Ensayo de toxicidad crónica con el
alga Selenastrum capricornutum
(Pseudokirchneriella subcapitata)
por el método de enumeración
celular basado en el uso de
hemocitómetro Neubauer
Yolanda Pica Granados, Alicia Ronco
y María Consuelo Díaz Báez

C lasificación

del ensayo :

IC

Principio de la prueba
El género y la especie de Selenastrum capricornutum fueron modificadosformalmente a Pseudokirchneriella subcapitata (Hindak, 1990); sin embargo,
para mantener consistencia con la literatura que la refiere, se empleará en éste
procedimiento su nombre original S. capricornutum.
S. capricornutum es una alga verde (clorofita) unicelular con forma de
media luna (figura 5.1) y un volumen aproximado de entre 40 y 60 µm3, que
puede encontrarse en sistemas acuáticosepicontinentales eutróficos u oligotróficos. Este ensayo puede ser utilizado por sí mismo o como parte de una
Este ensayo apareció publicado originalmente en G. Castillo (ed.). 2004. Ensayos toxicológicos y métodos
de evaluación de calidad de aguas. Estandarización, intercalibración, resultados y aplicaciones. IDRC,
IMTA, Canadá. 202 pp. Se reproduce con la autorización de la editorial.

69Intercalibrados

Ensayos de toxicidad crónica con el alga Selenastrum capricornutum

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Ensayos para agua dulce

batería para estimar la potencial de fitotoxicidad de aguas dulces superficiales
o subterráneas, aguas servidas y otro tipo de muestras líquidas, tales como
eluriados o lixiviados, agua intersticial de sedimentos o cualquier compuesto
puro soluble en agua. La prueba esespecialmente adecuada para ser practicada
en laboratorios que cuenten con una infraestructura básica, siendo un ensayo
sencillo y de bajo costo.
Figura 5.1. Microfotografìa de Selenastrum capricornutum

Cuando las células son expuestas a muestras que contienen contaminantes tóxicos su reproducción se afecta, alterando la tasa de crecimiento de la
población de las algas. El efecto de inhibiciónde la población causada por los
agentes tóxicos en una muestra luego de 72 horas de exposición, bajo condiciones de temperatura controlada (24 ± 2 ºC), se determina comparándolo con el
crecimiento normal observado en un sistema libre de agentes contaminantes,
conocido como control. Dependiendo del número de concentraciones y réplicas
preparadas para el desarrollo del experimento, se determinala CI50, la LOEC
y la NOEC.
El ensayo con el alga S. capricornutum presentado en este documento, es
una modificación del método estándar publicado por la Agencia de Protección
Ambiental de Canadá (Environment Canada, 1992). Los cambios introducidos

Ensayos de toxicidad crónica con el alga Selenastrum capricornutum

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(Blaise et al., 2000) corresponden al uso de volúmenes reducidos(2.6 mL en
viales vidrio de borosilicato de 20 mL) y la cuantificación de las células mediante
una cámara de conteo (Neubauer) utilizando un microscopio óptico.

Material
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Pipetas de vidrio graduadas de 5 y 10 mL
Pipeta automática de 100 µL con puntas estériles
Pipeta automática de 100-1 000 µL con puntas estériles
Viales decentelleo de vidrio de borosilicato claro de 20 mL de capacidad
Papel (film) transparente
Cámaras de iluminación (ver procedimiento complementario de este
documento)
Gasa y algodón
Tubo de vidrio o pipeta de vidrio despuntada
Manguera de acuario
Botellas o matraces aforados de 1 L
5 Botellas o matraces aforados de 500 mL
6 Botellas o matraces aforados de 100 mL
Recipiente de vidrio claro deboca angosta para cultivo, preferentemente
esterilizable, de 10 a 20 L de capacidad
Asas bacteriológicas
Tubos de centrífuga (opcional)
Tubos de cultivo con tapa de rosca
Tubos de centrífuga de plástico de 50 mL, con tapa de rosca y estériles
(opcional)
Hemocitómetro o cámara Neubauer
Matraz de filtración de 4 L

Equipo
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Microscopio óptico con aumento de 100X...