licenciado

GUIA DE LABORATORIO
Microbiología I
Universidad Nuestra Señora de La Paz

Dra. Katherine Rodríguez Ortiz

PR ÁCTI C A DE L ABOR ATO RIO N° 3

CULTIVOS Y MÉTODOS DE SIEMBRA

1. Objeti vos
Aprender
métodos
de
siembra
identif icación de microorganismos

para

el aislamiento e

2. Temas de estudi o
Medios de cultivo
Lectura macroscópica de colonias bact erianas
3. Fundamentoteórico
Un medio de cultivo es un sustrato estéril (líquido o sólido), que
contiene t odas las sustancias nutrit ivas m ínimas necesar ias para el
crecim iento y multiplicación de los m icr oorganismos. Un m edio de
cult ivo tiene por obj eto:
Fomentar el crecimiento microbiano
Facilitar algunas reacciones bioquím icas, percept ibles a la
obser vación
directa,
o
indirect amentedemostrables
tras
subsecuent e reacción en presencia de algunos reactivos
adicionales.
Los medios de cultivo pueden clasif i carse principalmente de acuerdo
a:
a) Su composición
b) Su estado f ísico
c) Su f inalidad micr obiana.

En cuanto a los métodos de siembra estos var ían de acuerdo al
estado f ísico del medio de cultivo.
En medios sólidos (agares), existen dos tipos:
Por incorpor aciónde la muestra en el medio de cultivo
Por extensión en superf icie de la muestra
En la siembra por incorporación (método en prof undidad), se mezcla
perf ectamente en una caja petri el inóculo con el medio de cult ivo
f undido.

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En la siem br a por ext ensión en superf icie (métodopor inundación),
un determinado volumen de muestra es suscept ible a ser absorbido
rápidamente en el m edio, por lo que ést e, se reparte estér ilmente de
manera homogénea sobre la superf icie del agar.
Para una ca ja
petri de 90 mm de diámetro, este volumen es de aproxim adamente
0.1 ó 0.2 ml.
En medios líq uidos (caldos), sólo se requiere de la inoculación
directa de la muestra en elmedio o de la agit ación del asa
cargada en éste.
4. Parte experimenta l
4.1 Material
Vidr ios de reloj
Varilla de vidrio
Probetas de 100 m l
Pipetas 5 ml
Pipetas 10 ml
Asas y agujas bact eriológicas
Matraces Erlenmeyer de 250 m l
Matraces Erlenmeyer de 500 ml
Tubos de cultivo 13 x 100 ml
Propipetas
Piceta

4.2 Reacti vos y medios de cultivo
Agua dest ilada
React ivo de KovacsAgar nutritivo
Agar Triple Azúcar Hierro (TSI)
Agar Sulf uro Indol Movilidad (SI M)
Agar citrato
Caldo cerebro corazón
4.3 Equipos
Autoclave
Balanza
Hornillas
Baño Mar ía 45 – 50ºC

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4.4 Procedimiento
4.4.1

Preparación de medios de cultivo
a) Para agares
Seguir lasinstrucciones indicadas en el frasco de cada
medio de cultivo
Llevar a ebullición por lo menos durante 5 minutos, para
obtener una buena disolución del medio.
Esterilizar en autoclave y repart ir en caj as Petri.
b) Para cal dos
Seguir las instrucciones indicadas en el frasco de cada
medio de cultivo
Por su f ácil disolución, no es necesario recurr ir
al
calentamiento,
es
suf iciente
llevara
esterilización en un matraz o en tubos con la
cantidad según las necesidades del análisis.

4.4.2

Métodos de si embra
a) Siembra en medio sólido en caja Petri
Simple agot amiento
Flamear el asa hasta que esté al rojo vivo
Enf riarla en agua dest ilada estéril o en un
borde del medio de cultivo estér il
Tomar la muestra o la colonia y proceder a
destapar la caja petri del medio decult ivo
nuevo
Colocar la inmediatamente en un ext remo de
éste
Con movim ientos suaves proceder a agotar la
muestra sobre el m edio, haciendo movimientos
de zig zag en dif erentes sectores de toda la
caja, de manera desordenada, per o teniendo el
cuidado de no super poner las estr ías
Cerrar la caja y volver a esterilizar el asa al
mechero
Cuadrantes
Dividir la caja en cuatro cuadr...