LICENCIATURA

UNIVERSIDAD NACIONAL
AUTÓNOMA DE MÉXICO
INSTITUTO DE
BIOTECNOLOGÍA
MÉTODOS FÍSICO-QUÍMICOS
EN BIOTECNOLOGÍA
PCR
ALUMNOS:
CORTAZAR MARTÍNEZ
ADRIANA
SILVA RINCÓN ELSA
PATRICIA
JUNIO, 2004

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ÍNDICE
Introducción
Historia y Desarrollo
Metodología básica
Componentes de la reacción
Nucleótidos
Primers
Especificidad
Secuencias complementarias
Contenido de G/C
Secuencia de losextremos 3’
Temperatura de asociación
Cálculo de la temperatura de fusión (Tm)
Programas de Diseño de Primers
Templado
Polimerasa
Concentración de Magnesio
Otros componentes de la reacción
Parámetros de la reacción
Desnaturalización
Alineamiento
Extensión
Número de ciclos
Termocicladores
Identificación de los productos de PCR
RT PCR
PCR en tiempo real
Técnicas de detección
SYBRgreenTM
Hydrolysis probes
Hairpin probes (Molecular BeaconsTM)
Hybridization probes
Scorpions
Cuantificación
Genes estándares
El efecto de limitar los reactivos
PCR competitivos cuantitativos
Máquinas para PCR en tiempo real
Ventajas del tiempo Real
Primers Degenerados
Uso de los primers degenerados
Diseño de los primers degenerados
Alineación de la secuencia
Información de lasecuencia terminal de aminoácidos
Degeneración de primers

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La reacción de PCR
El cóct el de PCR
Los ciclos de PCR (el termociclador)
Problemas comunes
Secuenciación
Controles
Long PCR
Aspectos Generales
Programa genérico paraLong PCR para el Perkin Elmer 9600
Hot Start
PCR in situ
Principios y Métodos
Otras variantes de la PCR
Multiplex PCR
Nested PCR
Clonación de productos de PCR
Clonación TA
Clonación de extremos romos
Clonación direccional a través de primers modificados.
Clonación de fragmentos largos de DNA
Mutagénesis por PCR
Mutagénesis con PCR-extensión solapada
Mutagénesis sitio dirigidaAplicaciones especiales de la PCR
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INTRODUCCIÓN
La biotecnología, en un sentido amplio se puede definir como la aplicación de
organismos, componentes o sistemas biológicos para la obtención de bienes y servicios. La
Ingeniería Genética (I.G.), conocida como tecnología del ADNrecombinante in vitro, se
caracteriza por su capacidad de cortar y empalmar genes o fragmentos de ADN de
organismos distintos, creando nuevas combinaciones no existentes en la Naturaleza,
combinaciones que ponemos a trabajar en el interior de una variedad de organismos
hospederos, para nuestro provecho.
No cabe ninguna duda de que la técnica más revolucionaria de los últimos 15 años
ha sido lareacción en cadena de la polimerasa (PCR), que ha dado nuevas alas a la propia
Ingeniería genética y a toda la biología molecular. Fue inventada por Kary Mullis a
mediados de los años 80.
Muchas de las técnicas clásicas de la Ingeniería genética estaban encaminadas a
resolver el complejo problema de cómo clonar o localizar un gen o un segmento de ADN.
Sin embargo, esas técnicas son a menudolargas y tediosas, y no es raro que no den
resultados. La PCR ha venido a cambiar el panorama, ya que permite en principio producir
in vitro grandes cantidades de una secuencia de ADN concreta sin recurrir a la clonación en
un organismo huésped. Esencialmente la técnica permite la amplificación selectiva de
cualquier segmento de ADN, conociendo las secuencias que lo flanquean. Como alguien hadicho, "es una técnica que consigue encontrar la aguja en el pajar, al tiempo que produce un
pajar de agujas por amplificación selectiva".
Las aplicaciones de la PCR y de sus numerosas variantes son prácticamente
ilimitadas:
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simplifica muchos experimentos de I.G.
permite muchos estudios de expresión genética
secuenciación directa de secuencias amplificadas...