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Tinciones
Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidad de los
mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes, lo que depende de la carga de la célula y del colorante.
Los colorantes pueden ser de distintos tipos:
Catiónicos: Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interior de las células y las tiñen. Ejemplos: azul demetileno, cristal violeta, safranina.
Aniónicos: Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no tiñen las células, sino el entorno. En este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina, nigrosina.
Liposolubles: Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: negro sudán.
Las tinciones pueden ser:
Simples: Utilizan un solo colorante. Se basan en el hechode que las células tienen una
composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de
forma diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células (azul de metileno,
safranina) o no (nigrosina).
Diferenciales: Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta composición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente auna tinción, lo 6 que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según su capacidad de
tinción.
Selectivas: Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta
composición química, de modo que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ej;
tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos metacromáticos.
Pueden utilizarseuno o más colorantes.
Tinción negativa
Es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir pero
se colorea un cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de
las células. La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que
no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las
células, talcomo la tinta china (que es una suspensión de partículas de carbono
coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). La tinción negativa
es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las células en microscopia
óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la presencia de cápsulas alrededor
de las células bacterianas.
Tinción de Gram
También puede utilizarse amenudo un método que no tiñe igualmente todas las
células, un proceso denominado tinción diferencial. La tinción de este tipo más
extensamente utilizada es la tinción de Gram, denominada así por el bacteriólogo
danés Hans Christian Gram, quien la desarrollo. Sobre la base de su reacción a la
tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y
gramnegativas.Debido a su importancia en taxonomía bacteriana y a que indica diferencias
fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aquí con
cierto detalle la tinción de Gram. Las células fijadas al calor sobre un portaobjetos
se tiñen primero con una solución de cristal violeta (otros colorantes básicos no son
tan efectivos) y son lavadas después para quitar el exceso decolorante. En este
estado todas las células, tanto las gramnegativas como las grampositivas, están
teñidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces con una solución de yodo (I2) –
yoduro potásico (KI). El ingrediente activo es aquí el yodo, el yoduro potásico
simplemente hace soluble el yodo en agua. El yodo entra en las células y forma un
complejo insoluble en agua con el cristalvioleta. De nuevo tanto las células
grampositivas como las gramnegativas se encuentran en la misma situación. Se
lleva a cabo después de la decoloración, usando bien alcohol o bien acetona,
sustancias en las que es soluble el complejo yodo – cristal violeta. Algunos
organismos (grampositivos) no se decoloran mientras que otros (gramnegativos) lo
hacen. La diferencia esencial entre esos...