Ligasas

LAS ADN LIGASAS

Las ADN ligasas catalizan la formación de un enlace fosfodiéster entre el 5' de un fosfato y el 3' de un nucleótido. Se usan para unir covalentemente cadenas de ADN.Por ejemplo, un fragmento dentro de otro. La DNA ligasa usada más habitualmente es la T4 DNA ligasa, que requiere ATP como cofactor. La ligación de moléculas de ADN puede realizarsede múltiples maneras.

Por ejemplo:Ligación intermolecular: entre dos cadenas distintas de ADN
Ligación intramolecular: entre los dos extremos de la misma cadena de ADN, Dadn olugar a un círculo
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La ligación en principio se producirá o bien entre extremos romos o bien entre extremos de DNAs digeridos con la misma enzima de restricción (Eco RI) y que, portanto, pueden aparearse. Sin embargo, en ocasiones, también pueden producirse entre moléculas digeridos con enzimas diferentes si los extremos que generan son compatibles (BamHI, BglII,Bcl ADN XhoII). | |
Dos moléculas digeridas con la misma enzima pueden unirse para formar un círculo, aunque también pueden adoptar dos configuraciones diferentes según laorientación en que se unan.
Si esto mismo lo hacemos con moleculas digeridas con dos enzimas adecuadas (Eco RI y Not I), podremos controlar la orientación. | |
En caso de no contar conenzimas adecuadas para unir las moléculas que nos interesan, aún así contamos con algunas posibilidades. Por ejemplo, el empleo de moléculas adaptadoras. Esto es, pequeñas moléculas de ADNbicatenario que se unen a los extremos del ADN mediante ligasas y que tienen una diana de restricción que nos interesa.
Otra posibilidad es la de añadir al extremo del ADN una "cola" demono nucleótidos en una de las moléculas de ADN, y del mono nucleótido complementario en la otra. Esto se realiza mediante un enzima denominada polinucleótido transferasa terminal. | |