Listeria monocytogenes

METODOS GENÉTICOS PARA EL ESTUDIO DE LOS FACTORES DE VIRULENCIA
* La manipulación genética in vitro es factible
* 1985 primer experimento de mutagénesis mediante transposones en L.Monocytogenes
* Los transposones Tn1545, Tn916, Tn917 y Tn917-lac pueden ser utilizados para el experimento anterior
* La tansformacion que implicaba la formacion del protoplasto es posible medianteelectroporacion.
* Variacion de eficacia y la complementacion de las mutantes espontaneas con bibliotecas de plasmidos no es posible, esta complementacion se puede realizar con genes clonadosENTRADA EN LAS CELULAS DE MAMIFERO
* Despues de la invasion de la barrera intestinal, los macrófagos y hepatocitos, son decisivos para la infeccion.
* Observaciones in vitro han conducido alsitio primario de entrada en el hospedador: la entrada en las celulas epiteliales, ha sido estudiada por medio de metodos geneticos:
* Los cuales conducen a la identificacion de la internalina(proteina necesaria para la entrada en las celulas epiteliales y codificada por el gen inlA)
* El gen inlB, coopera en la entrada en los hepatocitos in vitro
* El analisis de mutantes rugosasespontáneas, ha llevado a la identificacion de una segunda proteina p60, asociada a la invasión. Gen llamado iap.
LA INTERNALINA Y LA FAMILIA DE LOS GENES inl
* Biblioteca ideada de mutantes deltransposón Tn1545 y seleccionada en cuanto a las incapacidades de invadir la linea de las células Caco-2
* En tres mutantes el transposón se inserto en la misma posición aguas arriba de dos estructurasde lectura abierta, codificando a una proteina de 800 aminoacidos con secuencia de señales:
* Región A: caracteriza por repeticiones ricas en leucina y una región hibrófoba C-terminal (anclaje demembrana, precedida por hexapeptido LPTTGD).
* Este hexapéptido es distintivo de las proteinas ancladas de bacterias Gram positivas
* El gen inlA confiere capacidad invasora, ademas de que...