Métodos de inclusión

Tema 7: Métodos y técnicas de inclusión 1. Introducción: La inclusión permite obtener cortes finos y homogéneos para el cual las piezas acortan deberán tener una determinada consistencia y uniformidad. El medio de inclusión debe ser un medio líquido que posteriormente se solidifique de forma homogénea. Este medio de inclusión deber penetrar en todos los espacios libres de los tejidos. Hay mediosde inclusión que son solubles en agua y otros que no. En éste último caso ha de ser reemplazado por el solvente apropiado al medio de inclusión que se utilice con excepción de tejidos destinados a congelación, la mayor parte de loas muestras para estudio histopatológico, requiere la inclusión en un medio sólido y ésta puede hacerse de forma manual o automática. 2. Deshidratación por agentesquímicos. La deshidratación es el proceso que tiene por finalidad la eliminación completa del agua de la muestra tisular para que se pueda embeber (empapar) adecuadamente el tejido en aquellos medios de inclusión que no sean hidrosolubles. El método clásico de deshidratación es la sustitución del agua por el alcohol pero puede realizarse utilizando cualquier reactivo capaz de absorber el agua de lostejidos. Las condiciones esenciales de un buen deshidratantes (agente) son dos: 1. No debe alterar la estructura tisular. 2. Es que debe poder mezclarse con el reactivo intermediario o agente aclarante. Ventajas: 1. Rapidez en concluir la deshidratación. 2. Reducir a un mínimo aceptable el endurecimiento que provoca en los tejidos 3. Su toxicidad y peligrosidad sea mínimo con escaso desprendimiento devapores tóxicos. 4. Tuviera menos riesgos de incendio−explosión. 5. Baja toxicidad por inhalación, ingestión y contacto. El proceso de deshidratación suele realizarse mediante el empleo de alcohol etílico y en el suelen intervenir los siguientes parámetros: A. Graduación de los alcoholes: en la práctica la operación de deshidratación se realiza empleando una serie de alcoholes de gradaciónascendente (50, 70, 80, 95, absoluto). Esto se hace así porque la acción brusca de un alcohol de mayor gradación sobre el tejido provocaría una marcada retracción de éste, el empleo de series mas o menos largas de alcoholes de distinta gradación así como la decisión de iniciar el proceso en un alcohol de gradación media o menor van a estar en función primero de la experiencia del personal, de lafragilidad de los tejidos y del tipo de fijador utilizado, ya que los 1

fijadores con base alcohólica realizan cierta deshidratación durante el proceso de fijación. B. Volumen y el número de los baños de deshidratación: No es necesario o preciso que el volumen de alcohol sea demasiado alto por lo general suele recomendarse un volumen del baño 10 veces mayor al volumen de la muestra que se va adeshidratar. Lo que se recomienda es multiplicar el número de baños. Se hacen baños sucesivos y múltiples que nos aportan las siguientes ventajas: Ventajas: 1. Al permanecer menos tiempo en cada baño menor el resigo de endurecimiento excesivo del tejido. 2. El menor índice de saturación de agua en alcohol lo que posibilita la reutilización del baño de alcohol 3. Se controla mejor el grado dedeshidratación de la pieza. 4. Hay menos riesgo de alteración tisular producida por un cambio brusco en la fuerza de estación del agua. − DURACIÓN DE LA DESHIDRATACIÓN: Esta va a estar en función en volumen de los fragmentos titulares y de su contenido en agua y hay que tener en cuenta dos cosas: 1) Deshidratación ha de ser completa 2) La exposición prolongada al agente deshidratante provoca unendurecimiento de los tejidos. A veces en investigación se usan agentes accesorios que eliminan el exceso de agua en los deshidratantes y supone un cierto ahorro porque permite reutilizar el baño deshidratantes. Se utiliza el sulfato de cobre anhidro que sirve al mismo tiempo como indicador del grado de deshidratación del baño de alcohol porque los cristales de sulfato de cobre adoptan una tonalidad azul...