Método de Kunitz

Introducción
Una enzima es una molécula proteica globular capaz de catalizar y acelerar reacciones químicas específicas. La actividad molar de las enzimas es muy alto; una molécula de enzima puedetransformar hasta 600,000 moléculas de sustrato por segundo, todas las enzimas son proteínas producidas por células vivas, son las más variadas y más altamente especializadas por los sustratos. Sehan descubierto en diferentes organismos miles de enzimas distintas cada una, las cuales catalizan un tipo diferente de reacciones químicas y funcionan en soluciones acuosas en condiciones químicas muysuaves de temperatura y pH. Por lo general estas sustancias tampoco afectan el equilibrio de una reacción química, sino que simplemente la aceleran hasta alcanzar el equilibrio.

Las enzimasproteolíticas (comúnmente llamadas proteasas) pertenecen al grupo de Hidrolasas, ya que catalizan la degradación de otras proteínas hidrolizando los enlaces peptídicos con diferentes grados de intensidad yde selectividad. Un enlace peptídico es la unión que se realiza entre el grupo ácido de una aminoácido con el grupo amino de otro, con la consecuente eliminación de una molécula de agua

Uno de losmétodos más utilizados en la determinación de la actividad de las enzimas proteolíticas es el método de Kunitz, que se basa en medir la cantidad de péptidos y aminoácidos solubles liberados durante lahidrólisis aprovechando la capacidad, de algunos de ellos, de absorber selectivamente a 280 nm.


Objetivos.

Elaborar una curva estándar de actividad enzimática
Determinar la actividadproteolítica de la bromelaína, la papaína y otras proteasas



Resultados
Tabla 1. Actividad enzimática de la tripsina
Tubo
Concentración de Tripsina (mg/mL)
A280
A280 corregida


ProblemaTestigo

T1 y 1
0.04
0.279
0.064
0.215
T2 y 2
0.08
0.396
0.122
0.274
T3 t 3
0.12
0.542
0.053
0.489
T4 y 4
0.16
0.629
0.060
0.569
T5 y 5
0.20
0.696
0.038
0.658
Problemas...