Método de la O-Toluidina

Cuantificación de la glucosa
por el método de la O·Toluidina
EDUARDO BRILLA*
MIGUEL ESQuNEL**

RESUMEJIo.
Se presenta un estudio analítico en toro
no al método de la O-Toluidina para glucosa
sérica. El límite máximo de la linearidad
bajo las condiciones usadas fue de 500 mg!
dI. Las pruebas de reproducibilidad most-:'lron coeficientes de variación para valol~.s bajos, intermedios yaltos de glucosa
l'lérica de 3,6, 2.4 y 1.8% respectivamente.
Las pruebas de recuperación en suero y en
orina mostraron resultados aceptables dentro de los rangos permisibles.
Se observaron coeficientes de correlación muy buenos entre este método y los
de Folin-Wu nlOdificados (r = 0.96) y ferricianuro automatizado (r=0.99). Los valores margen normales de una población estudiantil universitaria,de uno y otro sexo,
fueron de 70 a 104 mgjdl (± 2 D.S.)

El producto coloreado fina les el resultado de la reacción de la O-to1uidina con
la glucosa, formándose gIucosilamina y la

*
**
18

Cátedra de Química Clínica, Departamento
de Análisis Clínicos, Facultad de Microbiología, Universidad de Costa Rica, Hospital
San Juan de Dios.
Laboratorio Clínico, Hospital San Juan de
Dios.Act. Méd. Costo 20-, 18 - 23, 1977

KARL SCHOSINSKY*
MIGUEL CHAVARRIA*

La determinación cuantitativa de glucosa
en sangre ha preocupado a muchos químicos clínicos desde hace muchos años. Por
tratarse de un análisis rutinario, con frecuencia de informe urgente y ante la necesidad
de ofrecer resultados exactos y precisos a
través de procedimientos sencillos, rápidos
y económicos, nos dimos ala tarea de estudiar el método de la O-toluidina, cuyas bondades mencionadas en la literatura lo señalan como método de elección para cualquier
laboratorio.
La utilización de la O-toluidina en la
determinación de aldosacáridos en un medio
de ácido acético, fue establecido como método rutinario por Hultman (7), procedimiento que ha sido modificado por varios
autores y utilizado en métodosmanuales y
automáticos (2.10). Se fundamenta el procedimiento en una reacción de condensación
de la glucosa y aminas aromáticas primarias
en un medio de ácido acético glacial, según
la siguiente secuencia de reacciones:

correspondiente base de Schiff (9). Este
producto coloreado tiene un máximo de absorción de 625 a 635 nm (1), cuya densidad óptica se incrementa proporcionalmente de acuerdo ala ley de Beer-Lambert
entre una amplia gama de concentraciones
(O a 500 mg/dl en nuestro laboratorio), sin
embargo se recomienda leer el producto
coloreado final entre 0.1 a 1.0 de absorbancia.

Materiales y Reactivos:
O-toluidina, 5%

Disuelva 1.5 gramos de tiourea (grado
reactivo) en 500 ml de ácido acético glacial (grado reactivo) contenido en un balón aforado de un litro. Agregue50 mI de
O-toluidina (The British Drug Rouses Ltd.,
Englad) y complete a un litro con ácido
acético glacial. Mezcle esta solución y conserve a temperatura ambiente en un frasco
ámbar al abrigo de la luz. El reactivo se
puede utilizar recién preparado y es estable
por un período de varios meses (9).
Patrón de Glucosa de reserva (10 mg/ml)

Disuelva en un balón aforado de 100
mI un gramo(1.000 g) de glucosa anhidra (Q.P.) en una solución acuosa de ácido
benzoico (0.2 g/dI). Esta solución es establ ea temperatura ambiente.
Patrón de. glucosa de. trabajo

Diluya apropiadamente el patrón de reserva para obtener los distintos v¡tlores deseados en la calibración o para los controles
diarios (una dilución 1: 10 del patrón de
reserva proporcionará un patrón de trabajo de 100mg/dl).
Procedimiento

1) Coloque 5 mI del reactivo de O-toluidina en un tubo de rosca de 25 mI (esta
operación debe efectuarse mediante una
pipeta automática).
2) Agregue 0.1 mI de suero, plasma u
orina. Agite y cierre flojamente con un
tapón adecuado.
3) Coloque los tubos en baño de agua de
95 9 a 1009C por la minutos.
4) Enfríe por 2 a 3 minutos en agua del
tubo.
5) Lea a una longitud...