Método de Sanger
Páginas: 4 (796 palabras)
Publicado: 13 de febrero de 2014
PRÁCTICA No. 1
“DETERMINACION DEL AMINOACIDOS TERMINALES GRUPO ALFA AMINO LIBRE. METODO DE SANGER” Determinación del grupo amino terminal de la HEMOGLOBINA.
INTRODUCCION: El método del1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (DBFB) para la determinación en péptidos y proteínas de los aminoácidos con el grupo α.amino libre terminal, el DNFB actúa en condiciones ligeramente alcalinas formando losdinitrofenil derivados (DNP-aa) y al hidrolizar con HCl 6 N a una temperatura y presión dada, todos los enlaces peptídicos de la proteína se rompen, dejando solo el dinitrofenil derivado del aminoácido y todoslos demás aa libres. El reactivo de DNFB reacciona con los grupos imidazol, fenólicos y épsilon-amino, por lo que también obtiene DNP derivados de la histidina, tirosina y lisina. Por lo que esesencial la determinación de a)Dinitrofenilacion del aminoácido N-terminal de la proteína. b) Eliminación de DNFB que no reacciono. c) Hidrolisis de la DNP-proteína. d) Identificación del residuoN-terminal por cromatografía en papel.
REACCIONES:
1.1 Reacción del método de Sanger
1.2 Reacción del método de Edman.
Mientras que el método de SANGER solo se puede utilizar una vez,ya que en la hidrólisis se rompen los enlaces peptídicos de todos los aminoácidos que no reaccionan con el DNFB, en el método de Edman bajo condiciones ácidas se libera un derivado cíclico delaminoácido terminal, dejando intacto el péptido acortado de un aminoácido, lo que permite seguir realizando degradaciones de Edman consecutivamente a lo que queda del péptido, esto es muy importante, ya queno solamente se puede conocer el aminoácido con el grupo amino terminal, si no que con degradaciones consecutivas de Edman también se puede determinar en orden los demás aminoácidos que contiene unpéptido. Por lo tanto consideramos que es más conveniente utilizar éste método.
OBJETIVOS: Utilizar el método de Sanger para identificar los aminoácidos que contiene el grupo α_amino terminal de las...
“DETERMINACION DEL AMINOACIDOS TERMINALES GRUPO ALFA AMINO LIBRE. METODO DE SANGER” Determinación del grupo amino terminal de la HEMOGLOBINA.
INTRODUCCION: El método del1-fluoro-2,4-dinitrobenceno (DBFB) para la determinación en péptidos y proteínas de los aminoácidos con el grupo α.amino libre terminal, el DNFB actúa en condiciones ligeramente alcalinas formando losdinitrofenil derivados (DNP-aa) y al hidrolizar con HCl 6 N a una temperatura y presión dada, todos los enlaces peptídicos de la proteína se rompen, dejando solo el dinitrofenil derivado del aminoácido y todoslos demás aa libres. El reactivo de DNFB reacciona con los grupos imidazol, fenólicos y épsilon-amino, por lo que también obtiene DNP derivados de la histidina, tirosina y lisina. Por lo que esesencial la determinación de a)Dinitrofenilacion del aminoácido N-terminal de la proteína. b) Eliminación de DNFB que no reacciono. c) Hidrolisis de la DNP-proteína. d) Identificación del residuoN-terminal por cromatografía en papel.
REACCIONES:
1.1 Reacción del método de Sanger
1.2 Reacción del método de Edman.
Mientras que el método de SANGER solo se puede utilizar una vez,ya que en la hidrólisis se rompen los enlaces peptídicos de todos los aminoácidos que no reaccionan con el DNFB, en el método de Edman bajo condiciones ácidas se libera un derivado cíclico delaminoácido terminal, dejando intacto el péptido acortado de un aminoácido, lo que permite seguir realizando degradaciones de Edman consecutivamente a lo que queda del péptido, esto es muy importante, ya queno solamente se puede conocer el aminoácido con el grupo amino terminal, si no que con degradaciones consecutivas de Edman también se puede determinar en orden los demás aminoácidos que contiene unpéptido. Por lo tanto consideramos que es más conveniente utilizar éste método.
OBJETIVOS: Utilizar el método de Sanger para identificar los aminoácidos que contiene el grupo α_amino terminal de las...
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