Métodos de biología molecular dependientes de cultivo

Métodos moleculares dependientes de cultivo.

Los métodos microbiológicos tradicionales han sido de gran ayuda para identificar y clasificar microorganismos desde hace muchos años. Sin embargo, sebasan en criterios fenotípicos (i.e. morfológicos, utilización de nutrientes, formación de algún metabolito, etc.) lo cual muchas veces no permite distinguir entre organismos cercanos. Los métodosmoleculares, al ser basados en características genotípicas, pueden distinguir incluso entre cepas de la misma especie. Es por eso que lo más conveniente es complementar los métodos tradicionales con losmoleculares para tener un mejor panorama.
Estos métodos incluyen: perfil de plásmidos, análisis de restricción enzimática, polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP),ribotipificación, electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE), amplificación aleatoria de ADN polimórfico (RAPD), análisis de restricción de ADN ribosomal amplificado (ARDRA), polimorfismos en la longitud defragmentos amplificados (AFLP) y secuenciación. En todos los casos es necesario tener el microorganismo aislado para poder hacer la tipificación, por lo que es de suma importancia tener colonias puraspara evitar resultados erróneos.
Existen varias aplicaciones de estas metodologías como estudios clínicos, epidemiológicos e incluso de importancia económica y de propiedad intelectual. Tal es el casode la identificación de cepas de levadura en la producción de vinos usando RFLP y MLST para confirmar que la información de la etiqueta sea veraz y no te den “gato por liebre”. Otro ejemplo es laidentificación de perlas de ostras del género Pinctada mediante RFLP. Esto tiene un impacto económico muy fuerte y ayuda a prevenir fraudes.
El uso de bioinformática ha permitido un gran avance en estosmétodos. Existe gran cantidad de software en la red para el análisis de imágenes de geles, alineamiento de secuencias y para generar árboles filogenéticos. Muchos de éstos son gratuitos, pero otros...