Métodos de estudio de susceptibilidad antifúngica en el laboratorio de microbiología
Páginas: 7 (1510 palabras)
Publicado: 28 de enero de 2010
Métodos de estudio de susceptibilidad antifúngica en el laboratorio de microbiología
Beatriz Elena Ariza Ayala. Bacterióloga. Msc. Docente Facultad de Medicina y Especialización en microbiología Clínica de la Universidad Javeriana
La realización de pruebas de susceptibilidad antifúngica es una herramienta importante en el laboratorio clínico como resultado de muchos factores. Algunos deellos, como el incremento en la incidencia de dichas infecciones durante los últimos 15 años, la aparición de nuevas especies de hongos patógenos emergentes y los cada vez más frecuentes reportes de resistencia asociados a fallos terapéuticos, especialmente en pacientes inmunodeprimidos, llevan a la necesidad inminente de desarrollar bases de datos confiables acerca de la relación entre losresultados in vitro y el resultado clínico de las terapias para infecciones fúngicas. (1)
Las pruebas de susceptibilidad antifúngica siguen los mismos principios de los test para agentes antibacterianos y la mayoría proveen resultados cuantitativos, en concentración mínima inhibitoria (CMI). Un test, ya sea antimicrobiano o antifúngico ideal debe ser sencillo, confiable y establecer el punto finalde CMI que pueda correlacionar y predecir in vivo el resultado o respuesta clínica, así mismo, debe servir para monitorear el desarrollo de la resistencia en una población normalmente susceptible.
En el caso concreto de las micosis, dichos estudios se realizan mediante técnica de microdilución, E-test, difusión en disco o curvas de muerte. Algunas características importantes de cada uno de losmétodos se describen a continuación.
Método de Referencia de Microdilución M27-A. (2,3)
La estandarización puede jugar un papel importante en la necesidad de evaluar in vitro vs. in vivo la eficiencia de antimicóticos. Como respuesta a esta necesidad el Comité Nacional de Estándares de Laboratorio (National Commitee for Clinical Laboratory Standard- CLSI) en 1982 estableció un subcomitécoordinador de trabajo sobre pruebas de susceptibilidad a dichos agentes. La meta del subcomité fue desarrollar un método eficaz de referencia para pruebas de susceptibilidad de levaduras in vitro y buscar que se correlacionara con la respuesta clínica. Como resultado la CLSI propuso el método de referencia M27-A para levaduras como Candida spp, Torulopsis glabrata y Criptococcus neoformans.
Elmétodo que describe este estándar está pensado para evaluar levaduras que causan infecciones invasivas. Estas infecciones abarcan todas las especies de Candida y Cryptococcus neoformans var. neoformans. Esta metodología no se ha aplicado para evaluar la fase levaduriforme de los hongos dimórficos como Blastomyces dermatitidis o Histoplasma capsulatum var. capsulatum.
El documento M27A es un“ESTANDAR DE REFERENCIA”. Se ha desarrollado a través de un proceso de consenso para facilitar un acuerdo sobre la forma de evaluar la sensibilidad de las levaduras a los antifúngicos.
Difusión en disco (2,4)
La técnica utilizada más comúnmente a nivel mundial para la comprobación de la sensibilidad antibacteriana es la prueba de difusión de disco, la cual produce un resultado cuantitativo (zonaso diámetros de inhibición) y una categoría interpretativa cualitativa. Con el fin de simplificar la determinación de la sensibilidad de Candida sp. Al grupo de azoles en el laboratorio clínico, el Subcomité del CLSI ha desarrollado un método de disco estandarizado (M44-A). Este método de difusión de disco para las levaduras es similar a los usados para las bacterias y el medio estándard es el agarde Mueller Hinton con dos suplementos, 2% de glucosa y 0.5 µg/mL de azul de metileno.
Los aislamientos Candida parapsilosis ATCC 22019, C. krusei ATCC 6258, C. albicans ATCC 90028 y C. tropicalis ATCC 750 han sido seleccionados como cepas del control de calidad para esta prueba de disco; los diámetros de inhibición para categorizar cada aislamiento de Candida spp. como sensible, S-DD o...
Beatriz Elena Ariza Ayala. Bacterióloga. Msc. Docente Facultad de Medicina y Especialización en microbiología Clínica de la Universidad Javeriana
La realización de pruebas de susceptibilidad antifúngica es una herramienta importante en el laboratorio clínico como resultado de muchos factores. Algunos deellos, como el incremento en la incidencia de dichas infecciones durante los últimos 15 años, la aparición de nuevas especies de hongos patógenos emergentes y los cada vez más frecuentes reportes de resistencia asociados a fallos terapéuticos, especialmente en pacientes inmunodeprimidos, llevan a la necesidad inminente de desarrollar bases de datos confiables acerca de la relación entre losresultados in vitro y el resultado clínico de las terapias para infecciones fúngicas. (1)
Las pruebas de susceptibilidad antifúngica siguen los mismos principios de los test para agentes antibacterianos y la mayoría proveen resultados cuantitativos, en concentración mínima inhibitoria (CMI). Un test, ya sea antimicrobiano o antifúngico ideal debe ser sencillo, confiable y establecer el punto finalde CMI que pueda correlacionar y predecir in vivo el resultado o respuesta clínica, así mismo, debe servir para monitorear el desarrollo de la resistencia en una población normalmente susceptible.
En el caso concreto de las micosis, dichos estudios se realizan mediante técnica de microdilución, E-test, difusión en disco o curvas de muerte. Algunas características importantes de cada uno de losmétodos se describen a continuación.
Método de Referencia de Microdilución M27-A. (2,3)
La estandarización puede jugar un papel importante en la necesidad de evaluar in vitro vs. in vivo la eficiencia de antimicóticos. Como respuesta a esta necesidad el Comité Nacional de Estándares de Laboratorio (National Commitee for Clinical Laboratory Standard- CLSI) en 1982 estableció un subcomitécoordinador de trabajo sobre pruebas de susceptibilidad a dichos agentes. La meta del subcomité fue desarrollar un método eficaz de referencia para pruebas de susceptibilidad de levaduras in vitro y buscar que se correlacionara con la respuesta clínica. Como resultado la CLSI propuso el método de referencia M27-A para levaduras como Candida spp, Torulopsis glabrata y Criptococcus neoformans.
Elmétodo que describe este estándar está pensado para evaluar levaduras que causan infecciones invasivas. Estas infecciones abarcan todas las especies de Candida y Cryptococcus neoformans var. neoformans. Esta metodología no se ha aplicado para evaluar la fase levaduriforme de los hongos dimórficos como Blastomyces dermatitidis o Histoplasma capsulatum var. capsulatum.
El documento M27A es un“ESTANDAR DE REFERENCIA”. Se ha desarrollado a través de un proceso de consenso para facilitar un acuerdo sobre la forma de evaluar la sensibilidad de las levaduras a los antifúngicos.
Difusión en disco (2,4)
La técnica utilizada más comúnmente a nivel mundial para la comprobación de la sensibilidad antibacteriana es la prueba de difusión de disco, la cual produce un resultado cuantitativo (zonaso diámetros de inhibición) y una categoría interpretativa cualitativa. Con el fin de simplificar la determinación de la sensibilidad de Candida sp. Al grupo de azoles en el laboratorio clínico, el Subcomité del CLSI ha desarrollado un método de disco estandarizado (M44-A). Este método de difusión de disco para las levaduras es similar a los usados para las bacterias y el medio estándard es el agarde Mueller Hinton con dos suplementos, 2% de glucosa y 0.5 µg/mL de azul de metileno.
Los aislamientos Candida parapsilosis ATCC 22019, C. krusei ATCC 6258, C. albicans ATCC 90028 y C. tropicalis ATCC 750 han sido seleccionados como cepas del control de calidad para esta prueba de disco; los diámetros de inhibición para categorizar cada aislamiento de Candida spp. como sensible, S-DD o...
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