Métodos de secuenciación

¿CÓMO SE UTILIZAN LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN?
Las enzimas de restricción son producidas naturalmente por bacterias. Estas enzimas reconocen y se cortan en lugares específicos de la doble hélice del ADN y han hecho posible avances en áreas como la terapia génica y la producción farmacéutica.
Definición
Una enzima de restricción o una endonucleasa de restricción. Las enzimas de restricción sonproteínas que se encuentran en las células bacterianas que reconocen secuencias de ADN específico (ácido desoxirribonucleico) y luego cortan a través de la cadena de doble hélice en ese lugar. Estas enzimas de corte se investigaron por primera vez por Werner Arber, un bioquímico suizo en la Universidad de Ginebra. El descubrimiento de estas enzimas ha sido crítico en los avances de las tecnologías deADN recombinante (que implica una combinación de ADN de diferentes especies), así como terapias de genes.
Tipos
Hay miles de diferentes enzimas de restricción, cada una con el nombre de la bacteria de la que se originó. Estas enzimas reconocen y cortan cientos de secuencias únicas de ADN, típicamente seis y cincuenta y seis unidades de base largas. Los científicos seleccionan enzimas derestricción específica a utilizar en función del resultado deseado.
Método de acción
Las enzimas de restricción trabajan al concentrarse en una secuencia específica de pares de bases en el ADN. El ADN tiene cuatro bases de nucleótidos que se emparejan juntos; pares de adenina con la timina, y pares de citosina con guanina. La enzima de restricción hace que ambas cadenas del ADN se rompan, a menudoresultando en moléculas de ADN que sobresalen con bases no apareadas, o extremos pegajosos. Estos extremos pegajosos pueden estar unidos entre sí con pares de bases complementarias de ADN cortado con las mismas enzimas de restricción, incluso si el ADN es de una especie totalmente diferente.
Usos
A fin de que un gen funcione, no puede simplemente insertarse directamente en una célula. En primer lugar, loscientíficos deben usar enzimas de restricción para empalmar, o cortar, el gen que desean utilizar. La misma enzima de restricción a continuación, se utiliza para abrir el ADN en una célula huésped, o vector, que suministra el ADN. El vector puede ser bacteriano o viral. Si el objetivo es producir grandes cantidades del gen deseado, las células bacterianas se utilizan típicamente. Si el objetivo espara la terapia génica, una célula viral modificado se utiliza que puede infectar a partes específicas de una célula con el fin de integrar el nuevo material genético.
Beneficios
El descubrimiento de las enzimas de restricción ha abierto las puertas a los avances científicos en la terapia génica, así como productos farmacéuticos. En 1982, la insulina humana producida en bacterias modificadasgenéticamente fue el primer producto recombinante aprobado por la Administración de Drogas y Alimentos de EE.UU. para uso comercial. Algunos científicos esperan que la terapia génica pueda en última instancia conducir a tratamientos para enfermedades como el cáncer, enfermedades del corazón, el SIDA y la fibrosis quística.
USOS DE LAS ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Las enzimas de restricción tienen diferentesaplicaciones que son de gran importancia en investigaciones en biología molecular y en las técnicas que emplea la biotecnología moderna:
1. Hacer mapa de restricción de un plásmido o bacteriófago. El ADN se corta con varias enzimas de restricción, solas y en parejas, para determinar el número de sitios de corte y sus posiciones relativas en la molécula, el orden y la distancia entre ellos. 2. Fragmentar ADN para separación por electroforesis. Los fragmentos obtenidos después de la actuación de las distintas enzimas de restricción, se pueden separar por tamaños mediante la técnica de electroforesis y así estudiar los distintos fragmentos. Por ejemplo: para la técnica de Southern blotting o en las usadas para identificar polimorfismos de ADN en distintos individuos (RFLP).
3. Generación...