Métodos De Siembra En Agares

MÉTODOS DE SIEMBRA

• Siembra en masa

Se caracteriza porque durante la incubación las colonias crecen en el interior de la masa
del agar.

1. Se deposita 1 mL de la muestra (si es líquida) o de cada dilución en placas estériles,
vacías.
2. Se agrega a cada placa 15 a 20 mL del medio de cultivo a emplear, previamente
fundido y mantenido a unos 47ºC.
3. Se agita moviendo la placa tapadasobre la superficie de la mesa con movimientos
circulares y de vaivén (siempre sin levantar la placa de la mesa). Con esto se
consigue mezclar el inóculo con el agar.
4. Se deja solidificar el agar a temperatura ambiente (esperar al menos media hora)
y se llevan las placas a incubar (la temperatura y el tiempo de incubación elegidos
varía según el tipo de microorganismos).
5. Pasado eltiempo de incubación las colonias habrán crecido dentro del agar (en la
masa del agar). Elegir de entre todas las placas las dos correspondientes a aquella
dilución que presenten un número de entre 30 y 300 colonias /placa (esto proporciona
una precisión estadística suficiente y no es engorroso de hacer).
Para realizar el contaje, se utiliza un cuenta-colonias; se pone la placa de Petri
con labase hacia arriba y, si es preciso, se divide en sectores marcando mediante
un lápiz graso a lo largo de los diámetros. El número de unidades formadoras de
colonia o UFC/g (o mL en muestras líquidas) de la muestra original será:

Número de UFC/g = Número de colonias x factor de dilución

• Siembra en superficie

Se caracteriza porque durante la incubación las colonias crecen en la superficiedel agar.
1. Se utilizan placas previamente preparadas que contienen el medio de cultivo solidificado
(unos 15 mL/placa).
2. Se deposita en la superficie del agar 0,1 mL de la muestra o de cada dilución.
3. Luego de realizada la descarga de la muestra, se procede a extenderla sobre toda
la superficie de las placas, usando un asa de Drigalski estéril.
4. Esperar 2 ó 3 minutos a que se sequeel inóculo.
5. Se llevan las placas a incubar y se procede de la misma manera que en el caso
anterior.
TRANSFERENCIA

La técnica que se aplica depende de la consistencia de los medios de cultivo y del tipo de
recipiente que los contiene.

Se pueden presentar los siguientes casos:

- Siembra de medio líquido a medio líquido: El procedimiento se puede realizar
con asa en anillo, aguja opipeta y en tubos de ensayo, matraces o frascos.

- Siembra de medio sólido a medio líquido: El procedimiento se puede realizar
con asa en anillo o aguja y en tubo de ensayo, matraces o frascos.
- Siembra de medio sólido a medio sólido: El procedimiento se puede realizar
con asa o aguja y en tubo de ensayo, ya sea en superficie o en profundidad
o en placa Petri, en superficie.
- Siembra demedio líquido a medio sólido: El procedimiento se puede realizar
con asa en anillo, aguja o pipeta y en tubo de ensayo, ya sea en superficie
o en profundidad o en placa Petri, ya sea en superficie o por homogeinización.

1. Técnica de transferencia en tubos de ensayo.

Técnica para medio líquido
Los dos tubos, el que contiene el medio de cultivo sin sembrar y el que contiene losmicroorganismos
a transferir, se toman con una mano, con las bocas colocadas a la misma
altura.
Se sostienen con los dedos índice, medio y anular apoyándolos en el dedo meñique, y se
los sujeta con el dedo pulgar muy cerca de la base para permitir la visualización de toda
la superficie del cultivo.
Con los dedos pulgar e índice (como un lápiz) de la otra mano, se toma la pipeta estéril o
el mango deKoll con su aguja o asa en anillo y se esteriliza.
Se destapan los tubos con los dedos libres de la mano que sujeta el asa, de la siguiente
manera: el tapón del tubo más alejado del operador (que es el que contiene la muestra)
entre el dedo meñique y la palma de la mano; el tapón del tubo más cercano al operador
(que contiene el medio de cultivo estéril) entre el meñique y el anular.
Se...