Maiz

CARACTERIZACIÓN MOLECULAR Y BIOLÓGICA DE GENES RECOMBINANTES EN MAÍZ CRIOLLO DE OAXACA*
 
MOLECULAR AND BIOLOGICAL CHARACTERIZATION OF RECOMBINANT GENES IN MAIZE LANDRACES FROM OAXACA
 
Dora Alicia Landavazo Gamboa1, Karla Guadalupe Calvillo Alba1, Elsa Espinosa Huerta1, Laura González Morelos1, Flavio Aragón Cuevas2, Irineo Torres Pacheco1, Salvador Horacio Guzmán Maldonado1, Victor MonteroTavera1 y María Alejandra Mora Avilés1
 
1 Unidad de Biotecnología, Campo Experimental Bajío, INIFAP. Km. 6.5 carretera Celaya–San Miguel de Allende. Apartado Postal 112. 38010. Celaya, Guanajuato, México.
2 Campo Experimental Valles Centrales de Oaxaca, INIFAP.
 
Autora para correspondencia: 
mora.alejandra@inifap.gob.mx
 
* Recibido: Mayo de 2005 
Aceptado: Julio de 2006
 
RESUMEN
Seanalizó maíz criollo de tres regiones representativas de producción del estado de Oaxaca (Sierra Norte, Valles Centrales y Costa), con el fin de establecer la presencia de secuencias transgénicas. Las estrategias empleadas fueron: 1) búsqueda del promotor 35S del virus del mosaico de la coliflor por medio de PCR cualitativo, 2) detección inmunológica de la actividad de la enzima fosfinotricinacetil transferasa (PAT) que confiere resistencia a herbicida 3) detección de resistencia a la aplicación de glufosinato en plantas, 4) detección molecular del transgen bar, mismo que codifica la proteína fosfinotricin acetil transferasa, 5) determinación del contenido transgénico de las muestras positivas por PCR en tiempo real y 6) secuenciación de las bandas específicas de amplificación. Comoresultado de la primera estrategia se detectó la secuencia del promotor 35 S en plantas de cinco parcelas de maíz de la Sierra Norte, pertenecientes al distrito de Ixtlán. Este promotor no se detectó en el resto de las muestras colectadas de las regiones Valles Centrales y Costa. La detección inmunológica de la proteína PAT fue negativa en todas las muestras analizadas. De 143 5 plantas sometidas a laaplicación de glufosinato, 23 resistieron la actividad del herbicida; sin embargo, ninguna evidenció amplificación del fragmento del transgen bar. Las cinco plantas inicialmente positivas para PCR cualitativo se redujeron a tres muestras positivas por PCR cuantitativo y secuenciación. En conclusión, las muestras amplifi cadas para el promotor 35 S no evidenciaron presencia ni actividad delgen bar; sin embargo, podría ser otro el origen del promotor 3 5 S y la naturaleza de la resistencia al glufosinato en los maíces criollos de la Sierra Norte.
Palabras clave: Zea mays L., fosfinotricin acetil transferasa, glufosinato de amonio, PCR tiempo real, promotor 35S, virus del mosaico de la coliflor.
 
ABSTRACT
Maize landraces from three regions: Sierra Norte, Valles Centrales and Costa inthe state Oaxaca, were sampled looking for transgenic sequences. The strategies to accomplish this goal were: 1) search for 35 S promoter of the caulifl ower mosaic virus by qualitative PCR, 2) immunological detection of phosphinotricin acetyl transferase (PAT) enzyme activity, which confers resistance to the herbicides glufosinate, 3) detection of resistant plants to glufosinate, 4) detection ofthe transgene bar by PCR, 5) assessment of transgenic content by quantitative PCR and 6) sequencing of specific amplified fragments. The use of the first technique allowed for the detection of the 35S promoter sequence in plants from five plots from the Sierra Norte region, in the district of Ixtlan. The 35S promoter was not detected in samples from the other two regions. Immunological detection forthe phosphinotricin acetyl transferase protein was negative for all samples analyzed. Twenty–three plants out of 1435 were resistant to the herbicide glufosinate; however, none showed amplification of the bar transgene. Out of fi ve initial samples only three were confi rmed positive for 35S promoter by quantitative PCR and sequencing. The 35S positive samples did not test positive for...