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PROCEDIMIENTO
Para realizar una cromatografía de intercambio iónico son necesarios los siguientes materiales: (1) Columna de vidrio, (2) Matriz de intercambio iónico (Resina),(3) Eluyente, (4)Muestra a fraccionar y (5)Colectores .La mayoría de los experimentos basados en esta técnica están basados en 4 etapas
Equilibrio:
El primer paso es el equilibrio de la fase estacionaria con lascondiciones iniciales deseadas. Cuando el equilibrio se ha logrado, toda la fase estacionaria se encuentra asociada a iones complementarios (que pueden ser cloro o sodio).Por ejemplo, un intercambiadorcatiónico sulfonado asociado a Na+ producto de la disociación de NaOH.2.
Aplicación y Lavado:
El paso siguiente es aplicarla muestra la cual queremos filtrar a través de la columna mediante un lavadoespecífico. Para ello es necesario aplicar un buffer con el mismo pH y fuerza iónica que el buffer inicial para que todas las proteínas cargadas se unan al intercambiador. Por ejemplo: A la forma sódicade la resina lavada se le añade una solución ácida (pH=3) de la mezcla de aminoácidos; a dicho pH los aminoácidos se encuentran en forma de cationes con carga neta positiva. Los aminoácidoscatiónicos tienden a desplazar algunos de los iones ligados a las partículas de resina. A pH 3 los aminoácidos más básicos se unirán a la resina deforma más estrecha y los más ácidos o menos básicos, se uniránmenos.
Elusión:
Las moléculas captadas por el intercambiador son eluídas debido a cambios en la composición del buffer. Una manera común es incrementando la fuerza iónica con cloruro de sodio uotra sal común. Los aminoácidos serán eluídos dependiendo de la carga neta que estos posean. A medida que se aumenta gradualmente el pH y la concentración de NaCl del medio eluyente acuoso, losaminoácidos descienden en la columna a velocidades diferentes y pueden recogerse en muchas pequeñas fracciones. La disminución del pH protonará a los grupos de los aminoácidos por lo que su carga neta...