“Manipulación Y Análisis De La Información Genética: Aplicación En Diagnostico Molecular”

Universidad Católica de la Santísima Concepción Facultad de Medicina Departamento de Biología Molecular

“Manipulación y análisis de la información genética: Aplicación en Diagnostico Molecular”

Integrantes: - Sebastian Barraza - Alejandro Molina - Felipe Muñoz - Paulina Saavedra Docente: Catherine Guzmán Sección: II , Grupo III Prácticos: I 30 de Agosto II 6 de Septiembre III 13 deSeptiembre Fecha de entrega: 27 de Septiembre

Introducción El ácido desoxirribonucleico (ADN) es una macromolécula que contiene el mensaje genético para toda la función y organización celular. Es, en definitiva, la molécula que controla todos los procesos vitales para los seres vivos. Este ADN puede obtenerse de muchas fuentes mediante el método de la biopsia (recogida de porciones de tejido de unorganismo vivo con objetivos diagnósicos), puede recogerse de sangre, folículo piloso, huesos, tejidos acompañantes por lavados con disolución salina fisiológica fría, etc. Este ADN debe ser protegido refrigerándolo o congelándolo, la elección del tejido y tipo de extracción depende de muchos factores como en contenido de ADN, finalidad de estudio o necesidad de amplificación por PCR de pequeñasmuestras. En este informe daremos a conocer los mecanismos necesarios para el estudio del ADN. Empezaremos con la extracción y purificación del mismo. Dejando en claro que la extracción del ADN requiere una serie de pasos, entre los cuales en primer lugar tiene que romperse la membrana plasmática para poder acceder al núcleo celular y luego, de la misma forma, la carioteca o envoltura nuclear paradejar libre el ADN al cual siempre se debe proteger de enzimas como desoxirribonucleasas que puedan degradarlo. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica de biología molecular fundamental y por esto ampliamente utilizada cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un segmento de ADN específico, partiendo de un mínimo. De este modo describiremos el proceso de PCR parala amplificación de la secuencia Alu que se encuentra en el Locus PV92 del cromosoma 16. Estas secuencias Alu a amplificar son segmentos de unos 300 pb que se repiten más de 500.000 veces en el genoma humano. La presencia de este polimorfismo, posee un comportamiento dimórfico, es decir, se encuentra presente en algunos individuos y en otros no, por lo que su presencia será estudiada de maneraestadística. La electroforesis en gel es una técnica de laboratorio empleada para separar, en este caso, los fragmentos de DNA y se basa en la capacidad de las macromoléculas cargadas para desplazarse en un campo eléctrico a una velocidad proporcional a su carga e inversamente proporcional a su tamaño. En los ácidos nucleicos la dirección de migración en la electroforesis es del electrodo negativoal positivo, debido a la carga negativa dada por los grupos fosfato que estos poseen. Con esta técnica los fragmentos obtenidos por PCR fueron separados y analizados por electroforesis en geles de agarosa. En el presente informe se darán a conocer los métodos para la realización de estas tres etapas de estudio del ADN además del análisis e interpretación de los resultados.

Objetivos 1. Obtenery aplicar la información acerca de los procedimientos de purificación y aislamiento de ADN, amplificación mediante PCR y análisis por medio de electroforesis en gel. 2. Identificar polimorfismo de secuencias en el locus PV92 del cromosoma 16 humano. 3. Aprender y ejercitar en la utilización del material de laboratorio y entender la importancia de un trabajo meticuloso, y de lo necesario queresulta tomar las medidas preventivas y de protocolo utilizadas en los laboratorios de Biología Molecular.

Materiales 1.- Tubos Eppendorf de 1.5 ml, estériles 2.- Tubos de Extracción 3.- Tubos de PCR 0,2 ml 4.- Vasos de Toma de Muestra 5.- Micropipetas P1000, P 200, P 20 y P 10 6.- Puntas para Micropipetas 7.- Balsa de espuma para tubos eppendorf 8.- Adaptadores para tubos de PCR 9.- Vortex 10.-...