manual das elisa
Páginas: 6 (1458 palabras)
Publicado: 21 de noviembre de 2014
ELISA y DAS–ELISA en el diagnóstico y muestreo del virus de la tristeza de los cítricos
Los patógenos vasculares que infectan los cultivares comerciales de cítricos de forma sistémica, en ocasiones no son detectados por la manifestación de síntomas en las plantas, por lo que se requiere utilizar otros procedimientos para realizar su diagnóstico. Actualmente se dispone de procedimientosserológicos y moleculares para el diagnóstico de virus, viroides, bacterias y fitoplasmas que ocasionan severas enfermedades en cítricos. Sin embargo, existe un importante grupo de enfermedades poco caracterizadas cuyo diagnóstico está limitado al uso de plantas indicadoras.
De las 2.290 especies de virus descritas por el Comité Internacional de Taxonomía de Virus, se conocen alrededor de 950 queafectan plantas, equivalente al
41% (ICTV, 2010). Se reportan alrededor de 30 viroides que afectan cultivos importantes como: papa, tomate, lúpulo, aguacate y cítricos (Hammond & Owens, 2006).
Se conocen cerca de 1.600 especies de bacterias, de las cuales 100 causan enfermedades en plantas, equivalente al 16% (Agrios, 2005).
La selección del procedimiento de diagnóstico en estos programas serealiza teniendo en cuenta la rapidez de obtención de los resultados, exactitud, sensibilidad, costo, disponibilidad de reactivos específicos, así como los requerimientos de instalaciones y personal especializado. Teniendo en cuenta el valor del material de propagación certificado y el riesgo de multiplicar una infección por fitopatógenos, es indispensable utilizar métodos de diagnóstico deavanzada que confieran mayor precisión y confiabilidad a los resultados.
Virus: Proviene del latín ‘virus’, que significa veneno. Los virus son agentes infecciosos compuestos de una o varias moléculas de ácido nucleico (ADN o
ARN de cadena sencilla o doble) cubiertas por una o varias capas de proteína o lipoproteína capaces de replicarse en las células de un hospedante susceptible
(Hull, 2009).Para identificar virus en cítricos, hay que tomar en cuenta ciertos criterios del cultivo.
a) Síntomas en el campo. Utilice su propia información o use la proporcionada por quien envía la muestra.
b) Condiciones de cultivo. Información del tipo de suelo, prácticas de riego, fertilización y aplicación de plaguicidas.
c) Síntomas en detalle. Observación de manchas, añublo foliar, pudrición desemillas o frutos, cancros en las ramas o tallos, moteado en las hojas, pudrición o agallas en las raíces, etc.
d) Aislamiento. Aislar el microorganismo sospechoso en condiciones asépticas de laboratorio.
Para poder determinar el virus de la tristeza de los cítricos (VTC) el fundamental saber que es una enfermedad provocada por un virus de la familia Closteroviridae, género Closterovirus,que afecta a naranjos, mandarinos y pomelos injertados sobre la variedad de naranjo amargo. Se utiliza una Técnica inmunoenzimática ELISA. (Bridge, 2002)
Existen numerosos tipos de ELISA, que pueden agruparse en dos categorías: ensayos directos o indirectos. En los ensayos directos se utilizan como conjugados los anticuerpos específicos, que reconocen al patógeno, marcados con la enzima.
Consta delas siguientes etapas:
•Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados.
•Adición de anticuerpos marcados (“conjugados”) con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con los antígenos, el complejo quedará solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.•Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
•Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado. (Bridge, 2002)
Mientras que en los indirectos se emplean como conjugados anticuerpos que reaccionan con los anticuerpos de la especie animal en la que se produjeron los específicos del patógeno. Dentro de las...
Los patógenos vasculares que infectan los cultivares comerciales de cítricos de forma sistémica, en ocasiones no son detectados por la manifestación de síntomas en las plantas, por lo que se requiere utilizar otros procedimientos para realizar su diagnóstico. Actualmente se dispone de procedimientosserológicos y moleculares para el diagnóstico de virus, viroides, bacterias y fitoplasmas que ocasionan severas enfermedades en cítricos. Sin embargo, existe un importante grupo de enfermedades poco caracterizadas cuyo diagnóstico está limitado al uso de plantas indicadoras.
De las 2.290 especies de virus descritas por el Comité Internacional de Taxonomía de Virus, se conocen alrededor de 950 queafectan plantas, equivalente al
41% (ICTV, 2010). Se reportan alrededor de 30 viroides que afectan cultivos importantes como: papa, tomate, lúpulo, aguacate y cítricos (Hammond & Owens, 2006).
Se conocen cerca de 1.600 especies de bacterias, de las cuales 100 causan enfermedades en plantas, equivalente al 16% (Agrios, 2005).
La selección del procedimiento de diagnóstico en estos programas serealiza teniendo en cuenta la rapidez de obtención de los resultados, exactitud, sensibilidad, costo, disponibilidad de reactivos específicos, así como los requerimientos de instalaciones y personal especializado. Teniendo en cuenta el valor del material de propagación certificado y el riesgo de multiplicar una infección por fitopatógenos, es indispensable utilizar métodos de diagnóstico deavanzada que confieran mayor precisión y confiabilidad a los resultados.
Virus: Proviene del latín ‘virus’, que significa veneno. Los virus son agentes infecciosos compuestos de una o varias moléculas de ácido nucleico (ADN o
ARN de cadena sencilla o doble) cubiertas por una o varias capas de proteína o lipoproteína capaces de replicarse en las células de un hospedante susceptible
(Hull, 2009).Para identificar virus en cítricos, hay que tomar en cuenta ciertos criterios del cultivo.
a) Síntomas en el campo. Utilice su propia información o use la proporcionada por quien envía la muestra.
b) Condiciones de cultivo. Información del tipo de suelo, prácticas de riego, fertilización y aplicación de plaguicidas.
c) Síntomas en detalle. Observación de manchas, añublo foliar, pudrición desemillas o frutos, cancros en las ramas o tallos, moteado en las hojas, pudrición o agallas en las raíces, etc.
d) Aislamiento. Aislar el microorganismo sospechoso en condiciones asépticas de laboratorio.
Para poder determinar el virus de la tristeza de los cítricos (VTC) el fundamental saber que es una enfermedad provocada por un virus de la familia Closteroviridae, género Closterovirus,que afecta a naranjos, mandarinos y pomelos injertados sobre la variedad de naranjo amargo. Se utiliza una Técnica inmunoenzimática ELISA. (Bridge, 2002)
Existen numerosos tipos de ELISA, que pueden agruparse en dos categorías: ensayos directos o indirectos. En los ensayos directos se utilizan como conjugados los anticuerpos específicos, que reconocen al patógeno, marcados con la enzima.
Consta delas siguientes etapas:
•Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos. Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados.
•Adición de anticuerpos marcados (“conjugados”) con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con los antígenos, el complejo quedará solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.•Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
•Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado. (Bridge, 2002)
Mientras que en los indirectos se emplean como conjugados anticuerpos que reaccionan con los anticuerpos de la especie animal en la que se produjeron los específicos del patógeno. Dentro de las...
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