Manual De Electroforesis
Páginas: 5 (1031 palabras)
Publicado: 12 de julio de 2011
ANEXO A
STOCK SOLUCIONES:
1.- 2 M TRIS HCl (ph 8.8), 100 ml.
a) Pesar TRIS BASE 24.2 g.
b) Adicionar 50 ml. de agua destilada
c) Adicionar HCl concentrado lentamente hasta llegar a un ph 8.8 (cerca de 4 ml. de HCl concentrado)
d) Aforar a 100 ml. con agua destilada
2.- 1 M TRIS HCl (ph 6.8), 100 ml.
a) Pesar TRIS BASE 12.1 g.
b) Adicionar 50 ml deagua destilada
c) Adicionar HCl concentrado lentamente hasta llegar a un ph 6.8 (cerca de 8 ml de HCl concentrado)
d) Aforar a 100 ml. con agua destilada
3.-SOLUCIÓN “A” Acrilamida-Bisacrilamida
a) Pesar Acrilamida 30 g.
b) Pesar Bisacrilamida 0.8 g.
c) Adicionar agua destilada 100 ml.
4.- *SOLUCIÓN “B”
a) 75 ml TRIS-HCl (ph 8.8)
b) 4 ml SDS 10%c) 21 ml agua
• Estable por 3 meses en refrigeración
5.- SOLUCIÓN “C” BUFFER DE GEL CONCENTRADOR
a) 50 ml TRIS-HCl ph 6.8
b) 4 ml SDS 10%
c) 46 ml Agua
❖ OTRAS SOLUCIONES:
6.- PERSULFATO DE AMONIO
a) Pesar persulfato de amonio 0.5 g.
b) Adicionar agua 5 ml.
7.- SDS al 10%
a) Pesar SDS 10 g.
b) Adicionar Agua destilada 100 ml.8.-* BUFFER ELECTROFORESIS 10 X
|Reactivo |Cantidad (para 1 L.) |Cantidad (para medio litro) |
|TRIS (g) |30 |15 |
|GLICINA (g) |144 |72|
|SDS (g) |10 |5 |
|AGUA (ml) |1000 |500 |
*Ajustar a ph 8.3, estable a temperatura ambiente
9.- SOLUCIÓN TEÑIDORA
|Reactivo|Cantidad |
|Azul de coomassie R-250 (g) |0.25 |
|Acido acético glacial (ml) |10 |
|Metanol (ml)|50 |
|Agua destilada (ml) |100 |
10.- SOLUCIÓN DESTEÑIDORA
|Reactivo |Cantidad ||Metanol (ml) |250 |
|Agua destilada (ml) |200 |
|Acido acético (ml) |50 |PREPARACIÓN DE LA MUESTRA:
En los tubos Eppendorf se colocan 50µl de la dilución de la muestra de aislado de soya (0.5, 1.0, 2.0, 3.0) y 50 µl de la solución amortiguadora de muestra.
|Reactivo |Cantidad |
|Solución amortiguadora de muestra (µl) |950|
|Mercaptoetanol (µl) |50 |
Posteriormente dichas muestras se someten a calor a temperatura de ebullición en baño María durante 5 minutos exactos. Transcurrido este tiempo se toman 15 µl de la muestra y se colocan en los carriles del gel con una...
STOCK SOLUCIONES:
1.- 2 M TRIS HCl (ph 8.8), 100 ml.
a) Pesar TRIS BASE 24.2 g.
b) Adicionar 50 ml. de agua destilada
c) Adicionar HCl concentrado lentamente hasta llegar a un ph 8.8 (cerca de 4 ml. de HCl concentrado)
d) Aforar a 100 ml. con agua destilada
2.- 1 M TRIS HCl (ph 6.8), 100 ml.
a) Pesar TRIS BASE 12.1 g.
b) Adicionar 50 ml deagua destilada
c) Adicionar HCl concentrado lentamente hasta llegar a un ph 6.8 (cerca de 8 ml de HCl concentrado)
d) Aforar a 100 ml. con agua destilada
3.-SOLUCIÓN “A” Acrilamida-Bisacrilamida
a) Pesar Acrilamida 30 g.
b) Pesar Bisacrilamida 0.8 g.
c) Adicionar agua destilada 100 ml.
4.- *SOLUCIÓN “B”
a) 75 ml TRIS-HCl (ph 8.8)
b) 4 ml SDS 10%c) 21 ml agua
• Estable por 3 meses en refrigeración
5.- SOLUCIÓN “C” BUFFER DE GEL CONCENTRADOR
a) 50 ml TRIS-HCl ph 6.8
b) 4 ml SDS 10%
c) 46 ml Agua
❖ OTRAS SOLUCIONES:
6.- PERSULFATO DE AMONIO
a) Pesar persulfato de amonio 0.5 g.
b) Adicionar agua 5 ml.
7.- SDS al 10%
a) Pesar SDS 10 g.
b) Adicionar Agua destilada 100 ml.8.-* BUFFER ELECTROFORESIS 10 X
|Reactivo |Cantidad (para 1 L.) |Cantidad (para medio litro) |
|TRIS (g) |30 |15 |
|GLICINA (g) |144 |72|
|SDS (g) |10 |5 |
|AGUA (ml) |1000 |500 |
*Ajustar a ph 8.3, estable a temperatura ambiente
9.- SOLUCIÓN TEÑIDORA
|Reactivo|Cantidad |
|Azul de coomassie R-250 (g) |0.25 |
|Acido acético glacial (ml) |10 |
|Metanol (ml)|50 |
|Agua destilada (ml) |100 |
10.- SOLUCIÓN DESTEÑIDORA
|Reactivo |Cantidad ||Metanol (ml) |250 |
|Agua destilada (ml) |200 |
|Acido acético (ml) |50 |PREPARACIÓN DE LA MUESTRA:
En los tubos Eppendorf se colocan 50µl de la dilución de la muestra de aislado de soya (0.5, 1.0, 2.0, 3.0) y 50 µl de la solución amortiguadora de muestra.
|Reactivo |Cantidad |
|Solución amortiguadora de muestra (µl) |950|
|Mercaptoetanol (µl) |50 |
Posteriormente dichas muestras se someten a calor a temperatura de ebullición en baño María durante 5 minutos exactos. Transcurrido este tiempo se toman 15 µl de la muestra y se colocan en los carriles del gel con una...
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